[發明專利]包含編碼生長因子的外源多核苷酸的穩定的神經干細胞及其使用方法

在審

• 申請號: 201580057196.0
• 申請日: 2015-10-19
• 公開（公告）號: CN107148275A
• 公開（公告）日: 2017-09-08
• 發明（設計）人: 托馬斯·哈澤爾;卡爾·K·約赫
• 申請（專利權）人: 神經干細胞公司
• 主分類號: A61K35/30
• 分類號: A61K35/30
• 代理公司: 中原信達知識產權代理有限責任公司11219
• 代理人: 金海霞,楊青

優先權要求

本申請要求2015年4月15日提交的美國臨時申請號62/147,950的優先權和權益，并要求2014年10月20日提交的美國臨時申請號62/066,174的優先權和權益，每個所述臨時申請通過參考并入本文。

背景技術

由于胰島素樣生長因子-1(IGF-1)在哺乳動物中樞神經系統(CNS)中的細胞發育和存活中的關鍵作用，這種蛋白質對于影響CNS的各種不同病癥來說已被認為是潛在重要的治療劑。在動物模型中，通過某些方法(包括病毒載體和鞘內注射)遞送IGF-1，已顯示出治療ALS的希望。然而，在臨床試驗中，向人類患者皮下給藥成熟的重組IGF-1，在ALS的治療中沒有表現出功效。因此，對于將治療有效量的IGF-1遞送到神經元細胞損失的位點的改進的方法，存在著需求。

發明概述

本公開總的來說涉及包含編碼生長因子的外源多核苷酸的人類神經干細胞，所述生長因子包括例如神經營養因子。在實施方式中，所述生長因子被所述人類神經干細胞穩定地表達。這些人類神經干細胞可用于在需要的對象(例如患有神經變性疾病或障礙的人類對象)中治療神經變性疾病或障礙。

本公開提供了一種神經干細胞(例如穩定的人類神經干細胞)，其包含編碼胰島素樣生長因子1(IGF-1)的外源多核苷酸。所述神經干細胞表達、包括例如穩定地過表達IGF-1。所述包含編碼IGF-1的外源多核苷酸的神經干細胞與不包含編碼IGF-1的外源多核苷酸的神經干細胞相比，令人吃驚地產生數目顯著增加的GAD65陽性的GABA能神經元。

本公開還提供了一種神經干細胞(例如穩定的人類神經干細胞)，其包含編碼生長因子的外源多核苷酸。所述神經干細胞表達、包括例如穩定地過表達所述生長因子。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述生長因子是選自胰島素樣生長因子1(IGF-1)、神經膠質細胞系來源的神經營養因子(GDNF)、腦源神經營養因子(BDNF)、神經營養蛋白-3(NT-3)和血管內皮生長因子(VEGF)的神經營養因子。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，IGF-1是IGF-1同工型例如IGF-1同工型4。在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的其他實施方式中，所述IGF-1同工型4具有如SEQ ID NO1所示的核苷酸序列。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述IGF-1同工型包含N-端信號肽、成熟的IGF-1蛋白和E-肽。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述人類神經干細胞源自于選自下述的組織：皮層，海馬，丘腦，中腦，小腦，后腦，脊髓和背根神經節。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述人類神經干細胞是從胎兒或胚胎獲得的。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述人類神經干細胞是從具有約5至約20周胎齡的胎兒獲得的。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述人類神經干細胞能夠分化成神經元和/或神經膠質。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述人類神經干細胞能夠移植到腦和/或脊髓中。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述人類神經干細胞被永生化。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述人類神經干細胞通過用攜帶永生化基因的反轉錄病毒感染而被永生化。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述編碼生長因子的外源多核苷酸被可操作地連接到泛素C(UbC)啟動子(例如具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的泛素C(UbC)啟動子)、人磷酸甘油酸激酶1啟動子、人突觸蛋白啟動子或合成的CAG啟動子。

本公開還提供了一種人類神經干細胞，其包含編碼胰島素樣生長因子1(IGF-1)的外源多核苷酸，其中IGF-1包含如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，并且其中所述IGF-1核苷酸序列被穩定地表達。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述人類神經干細胞被永生化。

在上面提到或下面提到的實施方式的任一者的實施方式中，所述編碼IGF-1的外源多核苷酸被連接到泛素C(UbC)啟動子(例如具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的泛素C(UbC)啟動子)、人磷酸甘油酸激酶1啟動子、人突觸蛋白啟動子或合成的CAG啟動子。