[發明專利]制備其中苷元在細胞中積累的微生物制劑的方法和通過該方法生產的微生物制劑

有效

• 申請號: 201580056931.6
• 申請日: 2015-09-30
• 公開（公告）號: CN107636145B
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 鄭大均;金漢根;李承洙;鄭奉埈;金惠林;李允斗;樸宰演;全寶濫;金成宰
• 申請（專利權）人: RNA公司
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N1/19;C12N1/15;C12P1/00;A61K8/99;A61K8/9728;A61Q19/00;A61Q19/08;A23L33/135;A23L33/14;C12R1/25;C12R1/225;C12R1/23;C12R1/245
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 陳桉

本發明涉及用于制備自糖苷轉化的苷元或經水解的糖苷的方法，具體涉及通過使用產生β?糖苷酶的微生物使糖苷轉化成苷元形式或經水解的糖苷而自糖苷制備苷元或經水解的糖苷，然后回收在微生物的細胞中積累的苷元或經水解的糖苷的方法。

技術領域

本發明涉及一種在細胞中制備含有苷元(aglycone)的微生物制劑的方法，具體涉及一種制備微生物的方法，所述微生物通過使用產生β-糖苷酶的微生物將糖苷轉化為苷元形式，并且具有在細胞中積累的苷元。

背景技術

乳酸菌是人類可獲得的最有益的微生物之一，并且意指在發酵過程中分解碳水化合物如葡萄糖或乳糖以產生乳酸的細菌。1858年，法國微生物學家路易斯·巴斯德(LouisPasteur)發現了乳酸菌的存在，于1908年被授予諾貝爾生理學獎的俄國免疫學家伊拉·梅契尼科夫(Ilija Mecnikov)在其晚年宣稱“通過發酵乳永葆青春假說(the eternal youthhypothesis by the fermented milk)”，然后聲稱保加利亞人長壽的原因是乳酸菌發酵乳，而自該聲稱，全面研究已經開始，迄今為止已經發現了300多種乳酸菌。乳酸菌生活在包括人類在內的大多數哺乳動物的腸道中，且具體而言，在人體腸道中存在超過100萬億個結合健康和有害細菌的100種細菌。由于乳酸菌產生乳酸作為酸化腸道的代謝物，乳酸菌被稱為用于抑制有害細菌的增殖并通過異常發酵減少氨或致癌物的產生，即進行腸道調節的細菌。

已知乳酸菌的生理活性是它們主要產生有機酸以降低腸道的pH，其抑制腸道中有害細菌的增殖并維持正常的腸道微生物菌群。它們還用于將糖苷異黃酮轉化成苷元，其通過產生β-葡糖苷酶容易在體內吸收。

具體而言，在異黃酮的情況下，存在四種形式：與糖偶聯的糖苷、除去糖的苷元、乙酰葡糖苷和丙二酰葡糖苷，其中，苷元異黃酮通過在腸道中β-葡糖苷酶水解被轉化為苷元，作為活性苷元并被吸收。然而，一般食品中包含的異黃酮作為糖偶聯的糖苷形式存在，并且從飲食中攝取的異黃酮需要通過腸道微生物轉化成苷元形式以被吸收。因此，具有β-糖苷酶活性的微生物可在異黃酮的生物利用中發揮非常重要的作用。

作為相關技術中提取異黃酮的方法，有一種方法是用水提取包含異黃酮的植物的粉末，酸化提取物，將提取物從沉渣(sludge)中分離出來以通過填充有吸收樹脂的柱，使異黃酮吸收在樹脂上的提取物中，使醇溶劑通過柱，并回收吸附在樹脂上的異黃酮。作為另一種方法，有一種提取異黃酮的方法，其包括第一步驟：通過在環糊精、其衍生物或其聚合物中添加包含異黃酮的植物或植物加工產物，使異黃酮與環糊精、其衍生物或其聚合物結合并提取異黃酮，以及第二步驟：通過在第一步驟中形成的提取物中注入凝結劑并提取，從提取物中分離異黃酮和環糊精的結合物(binder)。具體而言，為了從天然豆類中提取苷元異黃酮，使用各種機械和化學方法，并且有使用超聲波提取異黃酮，然后通過液相色譜純化提取物的方法。然而，提取方法包括許多步驟，并且包括一些問題，如生產率降低、生產成本增加和純化過程中污染的可能性。

已經研究了通過微生物將糖苷異黃酮生物轉化成苷元異黃酮(Kuo等,ApplMicrobiol Biotechnol 2006.73:314-320；Lee等,J Agric Food Chem 2013.61:12101-12110)，并且最重要的是，通過乳酸菌將糖苷異黃酮生物轉化成苷元異黃酮是可能的，并且為此已經積極地進行了研究(Cavallini等,Alim.Nutr.2010.21:175-182)。舉例而言，Ali及其同事檢查了通過乳酸菌及脂肪和膽固醇代謝轉化成作為異黃酮糖苷代謝活性形式的苷元的效果。結果顯示，乳酸菌不誘導異黃酮的功效的增強。原因是乳酸菌的生物轉化效率低(Ali等,J Nutr Biochem.2004.15:583-90)。另據報道，當不添加豆漿時，通過乳酸菌雙歧桿菌屬轉化為苷元(的轉化率)為73-74％或以下。然而，在添加豆漿的情況下，轉化率提高到84％至85％(2007 11.Newhope 360.com)。