[發(fā)明專利]CD3結(jié)合結(jié)構(gòu)域

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580054757.1
• 申請日: 2015-08-05
• 公開（公告）號: CN107001468B
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 尤金·茹科夫斯基;梅爾文·利特爾;斯蒂芬·納克姆斯;烏維·羅伊施;克里斯蒂娜·埃爾萬格;伊維卡·法賽克;邁克爾·維謝爾;馬庫斯·埃澤爾;菲奧諾拉·麥卡利斯-埃澤爾
• 申請（專利權(quán)）人: 艾芙美德有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K16/30;C07K16/46;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京同達(dá)信恒知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11291
• 代理人: 黃志華;石磊

本公開涉及人源化CD3結(jié)合位點(diǎn)，其包含(a)如SEQ ID NO：8中所描述的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和如SEQ ID NO：3中所描述的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)；或(b)如SEQ ID NO：9中所描述的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)和如SEQ ID NO：4中所描述的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)。CD3結(jié)合位點(diǎn)具有增加的穩(wěn)定性，同時由于在位置VH111和VL49處的突變而保留了結(jié)合親和力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及包含新的CD3結(jié)合位點(diǎn)的抗原結(jié)合蛋白。特別地，本發(fā)明涉及多特異性抗原結(jié)合蛋白。所述新的CD3結(jié)合位點(diǎn)包含人源化VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域。

背景技術(shù)

CD3抗原與T細(xì)胞上的T細(xì)胞受體復(fù)合體相關(guān)。對CD3和靶細(xì)胞的抗原具有特異性的多特異性抗原結(jié)合蛋白可以觸發(fā)T細(xì)胞對靶細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。即，通過抗原結(jié)合蛋白與CD3以及與靶細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)胞)的多特異性結(jié)合，可以誘導(dǎo)靶細(xì)胞的細(xì)胞裂解。具有CD3結(jié)合位點(diǎn)的抗原結(jié)合蛋白及其產(chǎn)生是本領(lǐng)域已知的(并且描述于例如Kipriyanov等人，1999年，Journal of Molecular Biology 293：41-56；Le Gall等人，2004年，ProteinEngineering，DesignSelection，17/4：357-366)。

除了來源于四源雜交瘤的抗體，已經(jīng)設(shè)計了多種形式的多特異性重組抗體片段。多價抗體片段和可選的多特異性抗體片段的特定形式被稱為“串聯(lián)雙抗體”因?yàn)樗鼈兊脑O(shè)計是基于兩個不同多肽的V_H可變結(jié)構(gòu)域和V_L可變結(jié)構(gòu)域的分子間配對，如對雙抗體所描述的(Holliger等人，1993年，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：6444-6448)。所描述的抗體對腫瘤抗原和CD3是雙特異性的。與二價scFv-scFv(scFv)₂串聯(lián)相反，串聯(lián)雙抗體是四價的，因?yàn)樗鼈兙哂兴膫€抗原結(jié)合位點(diǎn)。串聯(lián)雙抗體缺乏免疫球蛋白恒定結(jié)構(gòu)域。據(jù)報道，串聯(lián)雙抗體具有諸如高親和力、更高親合力、更低清除率的優(yōu)點(diǎn)并顯示出有利的體外和體內(nèi)效率(Kipriyanov等人，J.Mol.Biol.(1999)293，41-56和Kipriyanov Meth.Mol.Biol.(2009)562，177-193)。

這種雙特異性串聯(lián)雙抗體可以在腫瘤細(xì)胞(例如B-CLL細(xì)胞)和人免疫系統(tǒng)的CD3⁺T細(xì)胞之間形成橋梁，從而允許殺死腫瘤細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞和T細(xì)胞的緊密結(jié)合誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的破壞。雖然這種串聯(lián)雙抗體已證明有利于治療應(yīng)用(例如，用于治療腫瘤的治療概念)，但是仍然需要改進(jìn)的抗原結(jié)合分子。

為了促進(jìn)在臨床前開發(fā)期間在非人靈長類動物(NHP)中募集T細(xì)胞的多特異性抗體片段的毒理學(xué)評估，需要交叉反應(yīng)性CD3結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

鼠IgG克隆SP34(EMBO J.1985.4(2)：337-344；J.Immunol.1986，137(4)：1097-100；J.Exp.Med.1991，174：319-326；J.Immunol.1991，147(9)：3047-52)與人結(jié)合，并且已經(jīng)選擇食蟹猴CD3ε用于人源化。

盡管通過將鼠VH CDR移植到最同源的人VH框架(人VH3_72)上進(jìn)行人源化導(dǎo)致分子保持功能，但是將鼠VL CDR移植到具有最高同源性的人VL框架(人vλ7_7a)上，令人驚訝地導(dǎo)致表達(dá)不良的串聯(lián)雙抗體或不能識別CD3的串聯(lián)雙抗體。

發(fā)明內(nèi)容

因此，本發(fā)明的目的是提供具有功能性VL/VH配對、良好穩(wěn)定性、良好表達(dá)和其它生物物理性質(zhì)的CD3結(jié)合結(jié)構(gòu)域。

這個問題已經(jīng)通過權(quán)利要求的主題而解決。