[發明專利]合成核酸的方法和設備

在審

• 申請號: 201580054493.X
• 申請日: 2015-08-18
• 公開（公告）號: CN107109452A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: J·W·愛夫卡維茨
• 申請（專利權）人: 分子組裝公司
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34;C12Q1/68
• 代理公司: 北京易光知識產權代理有限公司11596
• 代理人: 耿曉兵

1.一種合成寡核苷酸的方法，其包含：

在存在核苷酸轉移酶和不存在核酸模板下使連接到固體支撐物的寡核苷酸暴露于核苷酸類似物，以使得所述核苷酸類似物并入所述寡核苷酸中，

其中所述核苷酸類似物包含通過可裂解連接子與抑制因子偶聯的核苷酸，所述抑制劑在空間上防止所述核苷酸基轉移酶催化核苷酸或其它核苷酸類似物向所述寡核苷酸中并入直到通過裂解該等可裂解連接子而將所述抑制劑去除。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述核苷酸類似物包含以下結構：

3.根據權利要求1所述的方法，其中所述核苷酸類似物包含以下結構：

4.根據權利要求1所述的方法，其中所述抑制因子包含以下結構：

其中n＝1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述抑制因子包含類多肽。

6.根據權利要求1所述的方法，其中所述抑制因子包含聚合物。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述聚合物包含聚乙二醇。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述抑制因子是蛋白。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述抑制因子是納米粒子。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述抑制因子是直徑大于的大分子。

11.根據權利要求1所述的方法，其中連接到所述固體支撐物的所述核酸在存在水溶液下暴露于pH值在約6.5與8.5之間的所述核苷酸類似物。

12.根據權利要求1所述的方法，連接到所述固體支撐物的所述核酸在約35℃與39℃之間的溫度下在存在水溶液下暴露于所述核苷酸類似物。

13.根據權利要求1所述的方法，其中所述固體支撐物是珠粒、孔或栓釘。

14.根據權利要求1所述的方法，其中所述核酸是單鏈的。

15.根據權利要求1所述的方法，其中所述可裂解連接子包含當自所述核苷酸類似物裂解時形成環狀副產物的部分。

16.根據權利要求1所述的方法，其進一步包含：

使所述可裂解連接子裂解以產生天然核苷酸；和

在存在核苷酸基轉移酶和不存在核酸模板下使所述天然核苷酸暴露于第二核苷酸類似物。

17.根據權利要求1所述的方法，其進一步包含使所述寡核苷酸暴露于核酸外切酶。

18.根據權利要求1所述的方法，其進一步包含提供包含所述核苷酸類似物和所述核苷酸基轉移酶的水溶液。

19.根據權利要求1所述的方法，其中所述抑制因子包含帶電部分。

20.根據權利要求1所述的方法，其中所述核苷酸類似物包含核糖或脫氧核糖。

21.根據權利要求1所述的方法，其中所述核苷酸底物包含選自由以下組成的群組的堿基：腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶以及尿嘧啶。

22.根據權利要求1所述的方法，其中所述核苷酸基轉移酶包含與SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.5至少約90％一致的蛋白質序列。

23.根據權利要求1所述的方法，其中所述核苷酸基轉移酶來源于具有與SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.6至少約90％一致的核苷酸序列的生物體。

24.根據權利要求1所述的方法，其中所述核苷酸類似物以小液滴形式遞送。