[發(fā)明專利]全血樣品的穩(wěn)定化

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580054390.3
• 申請(qǐng)日: 2015-07-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106796219B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: R·桑德琳;K·王;S·泰西耶;M·托納
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 通用醫(yī)療公司
• 主分類號(hào): G01N33/50
• 分類號(hào): G01N33/50
• 代理公司: 北京林達(dá)劉知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

用于血液樣品(例如臨床血液樣品)穩(wěn)定化以便儲(chǔ)存或使用前運(yùn)輸?shù)姆椒āＪ纠缘膽?yīng)用包括但不限于：富集白細(xì)胞亞型如T細(xì)胞或中性粒細(xì)胞供細(xì)胞因子測(cè)定法和免疫測(cè)定法；從臍帶血或外周血分離祖細(xì)胞供移植；從母體血液分離胎兒細(xì)胞供診斷；和分選循環(huán)型腫瘤細(xì)胞供檢測(cè)和治療癌癥。

優(yōu)先權(quán)要求

本申請(qǐng)要求保護(hù)2014年8月15日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)62/037,632和2014年8月7日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)62/034,481的權(quán)益。前述申請(qǐng)的完整內(nèi)容通過(guò)引用方式并入本文。

聯(lián)邦贊助的研究和開(kāi)發(fā)

本發(fā)明根據(jù)美國(guó)國(guó)家衛(wèi)生研究院資助的基金編號(hào)EB002503和EB012493借助美國(guó)政府支持做出。美國(guó)政府在本發(fā)明中享有某些權(quán)利。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明用于使血液樣品例如臨床血液樣品穩(wěn)定化以便儲(chǔ)存的方法。

背景技術(shù)

外周血是門診中最頻繁接近的組織，并且在血液學(xué)、輸血、免疫學(xué)、再生醫(yī)學(xué)和腫瘤學(xué)中分離血源性細(xì)胞具有廣泛的臨床和科學(xué)重要性。最新微工程學(xué)(microengineering)進(jìn)展已經(jīng)大大增進(jìn)我們分離純的細(xì)胞群體及進(jìn)行高通量多維分析的能力(1)。快速增長(zhǎng)的血液芯片(blood-on-a-chip)技術(shù)領(lǐng)域已經(jīng)擴(kuò)展至多種應(yīng)用，從分離T細(xì)胞供HIV病情監(jiān)測(cè)(2)和多重檢測(cè)細(xì)胞因子分泌(3)；創(chuàng)傷和燒傷患者中中性粒細(xì)胞的基因表達(dá)譜(geneexpression profiling)(4)；富集CD34⁺造血干細(xì)胞(5)；至最小侵入性檢測(cè)來(lái)自母體血液的有核紅細(xì)胞(nucleated red blood cells，RBC)(6)以及罕見(jiàn)循環(huán)型腫瘤細(xì)胞供診斷癌癥(7)及鑒定可藥化突變(8)。

然而，類似于任何組織，全血(whole blood，WB)離體迅速劣化。降解事件如養(yǎng)分喪失、氧化應(yīng)激、摩爾滲透壓濃度(osmolarity)和pH變化，和有毒代謝副產(chǎn)物蓄積，迅速開(kāi)始。在數(shù)小時(shí)內(nèi)，中性粒細(xì)胞發(fā)生活化、突發(fā)性氧化作用以及壞死和凋亡。血液沉降造成物理應(yīng)激，并且因在加速附帶損傷和交叉活化的局促空間中機(jī)械壓縮壞死性細(xì)胞而加重降解。血液樣品的運(yùn)輸產(chǎn)生了誘導(dǎo)溶血和血小板活化的失控振蕩。這些損傷不僅影響樣品中目的細(xì)胞的活力和功能，還極大影響廣泛應(yīng)用的富集技術(shù)。例如，散播表面抗原造成基于抗體的分選作用無(wú)效。紅細(xì)胞疊連(rouleaux formation)可能挾裹稀有細(xì)胞。特別地，有效分選細(xì)胞必需的微流體分選技術(shù)受棘紅細(xì)胞(echinocyte，形成毛刺的衰老紅細(xì)胞)、血小板活化和凝固以及細(xì)胞聚集破壞。

對(duì)于其他復(fù)雜的全血保存策略，認(rèn)為否則可能有效抑制生物化學(xué)反應(yīng)的低溫范圍和降解過(guò)程不相容，主要原因在于冷誘導(dǎo)的血小板活化。因而，在現(xiàn)代輸血醫(yī)學(xué)中，全血一般在室溫儲(chǔ)存并且在24小時(shí)以內(nèi)處理成各種組分供專門儲(chǔ)存(9)。鑒于許多臨床相關(guān)測(cè)定法如測(cè)序和表達(dá)譜在大型醫(yī)學(xué)中心或診斷實(shí)驗(yàn)室中性能最佳，血液儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)暮笄谛枰?logistical needs)對(duì)基于血液的下一代醫(yī)療技術(shù)擴(kuò)散帶來(lái)嚴(yán)重約束。

將大大得益于全血保存改善的許多應(yīng)用當(dāng)中包括分離從實(shí)體瘤散布并且能夠使轉(zhuǎn)移灶血液學(xué)擴(kuò)散的循環(huán)型腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells，CTC)。高級(jí)微流體技術(shù)已經(jīng)能夠?qū)崿F(xiàn)從癌癥患者的外周血樣品分離這些極端稀有的細(xì)胞(10個(gè)億血細(xì)胞中一個(gè))，并且已經(jīng)在使用這些細(xì)胞及其分子特征標(biāo)識(shí)用于診斷、預(yù)后、鑒定可藥化突變以及產(chǎn)生患者特異性藥物篩選模型方面取得顯著進(jìn)展。然而，這些下游測(cè)定法嚴(yán)重依賴保留分子信息和細(xì)胞功能的有活力的、未固定CTC的分離。血液降解不僅限制CTC的分子分析，還干擾這些極端稀有細(xì)胞的精確微流體分離。

發(fā)明內(nèi)容