[發明專利]用于檢測第一和第二表位的空間接近性的方法

在審

• 申請號: 201580053163.9
• 申請日: 2015-09-30
• 公開（公告）號: CN106715724A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: F.范赫梅特;R.維姆伯格-弗里伊德;D.A.M.W.范斯特里普
• 申請（專利權）人: 皇家飛利浦有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/542;G01N33/68
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 唐華東,陳嵐

1.用于檢測對象樣品中蛋白的第一和第二表位(11, 21)或蛋白復合物(1)的第一和第二蛋白(10, 20)的第一和第二表位(11, 21)的空間接近性的方法，其中所述方法包括：

-將具有與其綴合的第一寡核苷酸（31）的第一結合構件（30）結合到所述第一表位（11），

-將具有與其綴合的第二寡核苷酸（41）的第二結合構件（40）結合到第二表位（21），和

-確定在與第一寡核苷酸（31）和第二寡核苷酸（41）相締合的供體熒光團（32）和受體熒光團（42）之間是否存在熒光共振能量轉移效應，其中熒光共振能量轉移效應的存在指示第一和第二寡核苷酸（31,41）的空間接近性以及，因此第一和第二表位(11,21)的空間接近性，

其中所述第一寡核苷酸（31）與所述第二寡核苷酸（41）至少部分互補，

其中所述第一寡核苷酸（31）最初提供有第一分離的屏蔽元件（33）和/或所述第二寡核苷酸（41）最初提供有用于防止所述第一和第二寡核苷酸（31，41）過早雜交的第二分離的屏蔽元件（33）。

2.根據權利要求1的方法，其中所述第一寡核苷酸（31）用供體熒光團（32）預標記和/或其中第二寡核苷酸（41）用受體熒光團（42）預標記，和/或

其中所述方法進一步包括：

-在結合第一結合構件（30）后，將供體熒光團（32）連接到第一寡核苷酸（31）上，和/或

-在結合第二結合構件（40）后，將受體熒光團（42）連接到第二寡核苷酸（41）上。

3.根據權利要求1的方法,其中所述方法包括:

-在結合所述第一結合構件(30)之后，從所述第一寡核苷酸(31)去除所述第一分離的屏蔽元件(33)，和/或

-在結合所述第二結合構件(40)之后，從所述第二寡核苷酸(41)去除所述第二分離的屏蔽元件(43)。

4.根據權利要求1或3的方法，其中所述第一分離的屏蔽元件（33）包含與第一寡核苷酸（31）至少部分互補并與其雜交的第一DNA或RNA鏈，和/或第二分離的屏蔽元件（43）包含與第二寡核苷酸（41）至少部分互補并與其雜交的第二DNA或RNA鏈。

5.根據權利要求4的方法，當從屬于權利要求3時，其中去除第一DNA或RNA鏈和/或第二DNA或RNA鏈包括熔化第一寡核苷酸（31）和第一DNA或RNA鏈的雜交和/或第二寡核苷酸（41）和第二DNA或RNA鏈的雜交。

6.根據權利要求4的方法，當從屬于權利要求3時，其中所述第一DNA或RNA鏈是第一RNA鏈，和/或所述第二DNA或RNA鏈是第二RNA鏈，其中去除第一RNA鏈和/或第二RNA鏈包括使用酶（50）。

7.根據權利要求2至6任一項的方法，其中所述方法包括：

-在結合第一結合構件（30）之后，提供用供體熒光團（32）預標記的第三寡核苷酸（34），其中所述第三寡核苷酸（34）與第一寡核苷酸（31）至少部分互補，并且供體熒光團（32）與第一寡核苷酸（31）的連接包括隨之與第三寡核苷酸（34）雜交，和/或

-在結合第二結合構件（40）之后，提供用受體熒光團（42）預標記的第四寡核苷酸（44），其中第四寡核苷酸（44）與第二寡核苷酸（41）至少部分互補，并且受體熒光團（42）與第二寡核苷酸（41）的連接包括隨之與第四寡核苷酸（44）雜交。

8.根據權利要求1-7任一項的方法，其中所述第一寡核苷酸（31）用供體熒光團（32）預標記，或其中第二寡核苷酸（41）用受體熒光團（42）預標記，其中所述方法包括：

-在結合第一和??第二結合構件（30,40）之后，添加受體熒光團（42）或供體熒光團（32），其嵌入到通過第一和第二寡核苷酸（31，41）的雜交形成的雙鏈中。