[發(fā)明專(zhuān)利]由干細(xì)胞分化肝細(xì)胞樣細(xì)胞

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201580050446.8
• 申請(qǐng)日: 2015-09-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107075467B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余嚴(yán)軍;D·潘;Y.C·卓;F·塔斯尼姆
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 新加坡科技研究局
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/07
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/07;C12N5/074;C12N5/0735;G01N33/50
• 代理公司: 北京派特恩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11270
• 代理人: 胡春光;張穎玲

公開(kāi)了分化干細(xì)胞以便獲得肝細(xì)胞樣細(xì)胞的方法，所述方法包括以下步驟：a)使定形內(nèi)胚層經(jīng)受至少一種表觀遺傳調(diào)節(jié)劑以獲得成肝細(xì)胞，和b)使所述成肝細(xì)胞經(jīng)受至少一種干細(xì)胞分化通路抑制劑以獲得肝細(xì)胞樣細(xì)胞；其中步驟a)和b)不包括使用生長(zhǎng)因子。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述表觀遺傳調(diào)節(jié)劑可以是丁酸鈉和/或DMSO，并且所述干細(xì)胞分化通路抑制劑可以是SB431542和/或DMSO。還公開(kāi)了由所述方法獲得的肝細(xì)胞樣細(xì)胞和這些細(xì)胞的用途諸如藥物篩選。

對(duì)相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

本申請(qǐng)要求于2014年9月19日提交的新加坡臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0201405916Y的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，該申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文用于所有目的。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及發(fā)育生物學(xué)。具體地，本發(fā)明還涉及用于將干細(xì)胞分化成更多個(gè)肝細(xì)胞樣細(xì)胞的組合物。本發(fā)明還涉及使用本發(fā)明的組合物將干細(xì)胞分化成更多個(gè)肝細(xì)胞樣細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

人肝細(xì)胞是用于肝毒性篩選的有價(jià)值工具，所述肝毒性篩選是用于藥物發(fā)現(xiàn)和開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵步驟。另外，肝細(xì)胞移植已經(jīng)證明是原位肝移植的有前途的替代方式。目前選擇用于藥物篩選和細(xì)胞治療的細(xì)胞系統(tǒng)是原代人肝細(xì)胞(PH)。然而，原代人肝細(xì)胞在臨床或藥學(xué)應(yīng)用中的效用受它們的可用性、供體變異性、受限的增殖和在延長(zhǎng)的培養(yǎng)期內(nèi)功能衰退的限制。因此，已經(jīng)將大量努力致力于衍生出功能性肝細(xì)胞的可替代的可擴(kuò)充來(lái)源，所述可替代的可擴(kuò)充來(lái)源可以克服與原代人肝細(xì)胞相關(guān)的缺點(diǎn)。

人胚胎干細(xì)胞(hESC)由于它們的不受限制的增殖和多能性分化能力而提供了原代人肝細(xì)胞的有吸引力的可替代細(xì)胞來(lái)源。因此，需要用于獲得和維持表現(xiàn)成人肝細(xì)胞表型的肝細(xì)胞樣細(xì)胞的方法。

發(fā)明內(nèi)容

在一個(gè)方面，提供了使定形內(nèi)胚層分化以便獲得肝細(xì)胞樣細(xì)胞的方法。在一個(gè)實(shí)施例中，所述方法包括以下步驟：a)使定形內(nèi)胚層經(jīng)受至少一種表觀遺傳調(diào)節(jié)劑以獲得成肝細(xì)胞，b)使所述成肝細(xì)胞經(jīng)受至少一種干細(xì)胞分化通路抑制劑以獲得肝細(xì)胞樣細(xì)胞；其中步驟a)和b)不包括使用生長(zhǎng)因子。

在另一個(gè)方面，提供了通過(guò)如本文所述的方法獲得的或通過(guò)如本文所述的方法能獲得的肝細(xì)胞樣細(xì)胞。

還在另一個(gè)方面，提供了如本文所述的肝細(xì)胞樣細(xì)胞在選自由下列各項(xiàng)組成的組的應(yīng)用中的用途：藥物毒性篩選、藥物細(xì)胞毒性評(píng)估細(xì)胞治療、組織工程和組織再生。

附圖說(shuō)明

當(dāng)結(jié)合非限制性實(shí)施例和附圖考慮時(shí)將參照詳細(xì)說(shuō)明來(lái)更好地理解本發(fā)明，在附圖中：

圖1示出了闡明用來(lái)使人胚胎干細(xì)胞(hESC)分化成肝細(xì)胞的三步驟方案的示意性圖示。左列示出了如本文所述的方案的實(shí)施例。右列闡明了如本領(lǐng)域中所公知的基于生長(zhǎng)因子的方案。如本領(lǐng)域中所公知的基于生長(zhǎng)因子的方案用作用于分析用小分子代替生長(zhǎng)因子的作用的對(duì)照。