[發明專利]糖底物的酶促轉磷酸化

在審

• 申請號: 201580048580.4
• 申請日: 2015-06-30
• 公開（公告）號: CN106715705A
• 公開（公告）日: 2017-05-24
• 發明（設計）人: V·納維茨卡斯;K-U·鮑爾代紐斯;M·布羅伊爾;P·維爾德貝格爾;M·普法伊費爾;B·尼德茨
• 申請（專利權）人: 巴斯夫歐洲公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12P19/02;C07H1/02;C07H11/04
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所11247
• 代理人: 胡晨曦,黃革生

1.通過酶促轉磷酸化制備一種或多種糖磷酸酯的方法，包括以下步驟：

(i)提供一種或多種糖底物，

(ii)提供一種或多種磷酸供體底物，

(iii)提供α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶，

(iv)將步驟(i)中提供的一種或多種糖底物和步驟(ii)中提供的一種或多種磷酸供體底物與步驟(iii)中提供的α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶在允許轉磷酸化的條件下一起溫育，

(v)任選地，純化在步驟(iv)中獲得的一種或多種糖磷酸酯。

2.根據權利要求1的方法，其中所述糖底物選自醛糖和酮糖，優選地選自葡萄糖、葡糖胺、N-乙酰葡糖胺、果糖、半乳糖、巖藻糖、甘露糖、山梨糖、木糖、阿拉伯糖、木糖醇、阿拉伯糖醇、鼠李糖和N-乙酰神經氨酸和這些糖的磷酸酯，優選這些糖的單磷酸酯。

3.根據權利要求1或2的方法，其中所述一種或多種磷酸供體底物選自α-葡萄糖-1-磷酸酯、葡萄糖-6-磷酸酯、果糖-6-磷酸酯和果糖-1-磷酸酯。

4.根據上述權利要求任一項的方法，其中步驟(ii)中提供的磷酸供體底物或磷酸供體底物之一是α-葡萄糖-1-磷酸酯。

5.根據權利要求4的方法，其中步驟(ii)包括在磷酸酯或一種或多種磷酸酯源的存在下通過蔗糖磷酸化酶或具有蔗糖磷酸化活性的酶將蔗糖經酶促轉化為D-果糖和α-D-葡萄糖-1-磷酸酯。

6.根據權利要求5的方法，其中步驟(ii)和步驟(iv)以及任選的步驟(iii)是同時進行，優選在一鍋反應中進行。

7.生物催化劑，其具有蔗糖磷酸化酶活性和α-葡萄糖-1-磷酸酶活性和/或包含蔗糖磷酸化酶和α-葡萄糖-1-磷酸酶或由蔗糖磷酸化酶和α-葡萄糖-1-磷酸酶組成。

8.根據權利要求7的生物催化劑在根據權利要求5或6的方法中的用途。

9.根據權利要求1-6任一項的方法，其中步驟(iii)包括通過宿主細胞表達α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶。

10.根據權利要求9的方法，其中所述α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶分別表達為重組融合蛋白，所述重組融合蛋白包含適合于分離所述α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶的標記。

11.α-葡萄糖-1-磷酸酶或具有α-葡萄糖-1-磷酸酶活性的酶用于一種或多種糖底物、特別是醛糖和酮糖的轉磷酸化的用途。