[發明專利]修飾型β-半乳糖苷酶

有效

• 申請號: 201580044502.7
• 申請日: 2015-08-13
• 公開（公告）號: CN106604991B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 石川一彥;石原聰;山口莊太郎
• 申請（專利權）人: 天野酶株式會社
• 主分類號: C12N9/38
• 分類號: C12N9/38;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/09;C12P19/04
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 苗堃;金世煜

1.一種β-半乳糖苷酶，由在基準β-半乳糖苷酶中選自以下的(1)～(3)中的一個或二個以上的氨基酸為脯氨酸的氨基酸序列構成，所述基準β-半乳糖苷酶由與序列號4表示的氨基酸序列的90％以上相同的氨基酸序列構成：

(1)與序列號4表示的氨基酸序列的166位的賴氨酸相當的氨基酸；

(2)與序列號4表示的氨基酸序列的307位的甘氨酸相當的氨基酸；

(3)與序列號4表示的氨基酸序列的833位的丙氨酸相當的氨基酸。

2.根據權利要求1所述的β-半乳糖苷酶，其與基準β-半乳糖苷酶相比耐熱性提高。

3.根據權利要求1或2所述的β-半乳糖苷酶，其中，(1)和(2)、(1)和(3)、或(1)～(3)為置換對象。

4.根據權利要求1～3中任一項所述的β-半乳糖苷酶，其中，基準β-半乳糖苷酶由序列號4表示的氨基酸序列構成。

5.根據權利要求1所述的β-半乳糖苷酶，由序列號9～15中任一個氨基酸序列構成。

6.一種β-半乳糖苷酶，由在基準β-半乳糖苷酶中選自以下的(1)～(3)中的一個或二個以上的氨基酸為脯氨酸的氨基酸序列構成，所述基準β-半乳糖苷酶由與序列號1～3中任一個氨基酸序列的90％以上相同的氨基酸序列構成，

(1)與序列號4表示的氨基酸序列的166位的賴氨酸相當的氨基酸；

(2)與序列號4表示的氨基酸序列的307位的甘氨酸相當的氨基酸；

(3)與序列號4表示的氨基酸序列的833位的丙氨酸相當的氨基酸。

7.一種基因，編碼權利要求1～6中任一項所述的β-半乳糖苷酶。

8.一種重組DNA，其中，包含權利要求7所述的基因。

9.一種微生物，保有權利要求8所述的重組DNA。

10.一種酶劑，其中，包含權利要求1～6中任一項所述的β-半乳糖苷酶。

11.一種低聚糖的制造方法，其特征在于，使權利要求1～6中任一項所述的β-半乳糖苷酶作用于具有β-1，3鍵、β-1，4鍵和β-1，6鍵中的至少一個的二糖、低聚糖或多糖。

12.一種β-半乳糖苷酶的設計方法，其中，包括以下步驟(i)和(ii)：

(i)在基準β-半乳糖苷酶的氨基酸序列中，確定選自以下的(1)～(3)中的一個或二個以上的氨基酸的步驟，所述基準β-半乳糖苷酶由與序列號1～4的氨基酸序列的90％以上相同的氨基酸序列構成：

(1)與序列號4表示的氨基酸序列的166位的賴氨酸相當的氨基酸，

(2)與序列號4表示的氨基酸序列的307位的甘氨酸相當的氨基酸，

(3)與序列號4表示的氨基酸序列的833位的丙氨酸相當的氨基酸；

(ii)以基準β-半乳糖苷酶的氨基酸序列為基礎，構建步驟(i)中確定的氨基酸被置換成脯氨酸的氨基酸序列的步驟。

13.根據權利要求12所述的設計方法，其中，基準β-半乳糖苷酶由序列號4表示的氨基酸序列構成。

14.一種β-半乳糖苷酶的制備方法，其中，包括以下步驟(I)～(III)：

(I)準備編碼序列號9～15中任一個氨基酸序列、或者利用權利要求12或13所述的設計方法構建的氨基酸序列的核酸的步驟；

(II)使所述核酸表達的步驟，以及

(III)回收表達產物的步驟。