[發明專利]用于單核細胞增多性李斯特菌檢測的序列和它們的用法

在審

• 申請號: 201580039030.6
• 申請日: 2015-07-16
• 公開（公告）號: CN106661626A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: S.L.布魯梅曼;S.瓦基;M.A.詹森;D.R.德馬科
• 申請（專利權）人: 納幕爾杜邦公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 唐華東,黃希貴

相關專利申請的交叉引用

本專利申請要求2014年7月18日提交的美國臨時申請序列號62/026,135的優先權，所述文獻全文以引用方式并入。

技術領域

本技術領域涉及基于核酸序列的存在的檢測單核細胞增多性李斯特菌血清型的方法，優選基于PCR的檢測方法，以及涉及因此有用的寡核苷酸分子和試劑以及試劑盒。

背景技術

單核細胞增多性李斯特菌是與即食型食品(例如奶酪和熟肉制品)以及加工食品(例如熱狗)相關的食源性疾病爆發的致病原。單核細胞增多性李斯特菌也是通常不與單核細胞增多性李斯特菌污染相關的甜瓜及其它食品有關的食源性疾病爆發的原因。李斯特菌病對于老年人和兒童可以極為致命，其死亡率高達40％。孕婦也易受所產生感染的影響，從而導致流產、死產或胎兒疾病。單核細胞增多性李斯特菌及其它李斯特氏菌屬菌種是在有利于其持久生存的各種場所中常見的環境細菌。各種食品生產設施可提供能允許李斯特氏菌屬菌種(包括單核細胞增多性李斯特菌)復制以及配料原料或食品制成品的可能污染的有利環境。李斯特氏菌屬的許多菌種能夠在冷藏溫度下存活并且繼續生長且數量增加。在相同的環境中可存在多個李斯特氏菌屬的菌種。用于檢測食品或食品制備環境中李斯特氏菌屬菌種的典型微生物學方法在篩選測定開始后可需要至多五天。在等待篩選測定結果時，產品的生產者或銷售商必須以相當可觀的費用儲存食品。在對李斯特氏菌屬的存在的后續測試呈陽性的環境中制備的食物可能需要在裝運之前就測定單核細胞增多性李斯特菌的存在或所報廢庫存的虧損。

因此，需要一種短時間出結果，準確度高，以及非常容易使用的檢測單核細胞增多性李斯特菌的檢定。

發明內容

一個方面是用于檢測樣品中單核細胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)的存在的方法，所述樣品包含核酸，所述方法包括：(a)提供反應混合物，所述反應混合物包含合適的引物對，該合適的引物對用于擴增單核細胞增多性李斯特菌的編碼肌醇單酮異構酶的基因(例如，loll)的至少一部分，(b)使用步驟(a)的反應混合物進行所述樣品的所述核酸的PCR擴增；以及(c)檢測步驟(b)的擴增，從而擴增的陽性檢出表明了樣品中單核細胞增多性李斯特菌的存在。

另一個方面是一種引物，該引物包括基于BLASTN比對方法與如SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9和10所示的多核苷酸序列具有至少90％序列同一性的多核苷酸序列。

另一個方面是一種引物，該引物包括基于BLASTN比對方法與如SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9和10所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。

另一個方面是Scorpion探針，該Scorpion探針包括基于BLASTN比對方法與如

SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16所示的多核苷酸序列具有至少90％序列同一性的多核苷酸序列。

另一個方面是Scorpion探針，該Scorpion探針包括基于BLASTN比對方法與如SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。

另一個方面是單核細胞增多性李斯特菌檢測序列，該檢測序列包括基于BLASTN比對方法與如SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16所示的多核苷酸序列具有至少90％序列同一性的多核苷酸序列。

另一個方面是單核細胞增多性李斯特菌屬檢測序列，該檢測序列包括基于BLASTN比對方法與如SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。