[發明專利]用于單核細胞增多性李斯特菌檢測的序列和它們的用法

在審

• 申請號: 201580039030.6
• 申請日: 2015-07-16
• 公開（公告）號: CN106661626A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: S.L.布魯梅曼;S.瓦基;M.A.詹森;D.R.德馬科
• 申請（專利權）人: 納幕爾杜邦公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 唐華東,黃希貴

1.一種用于檢測樣品中單核細胞增多性李斯特菌的存在的方法，所述樣品包含核酸，所述方法包括：

(a)提供反應混合物，所述反應混合物包含合適的引物對，所述合適的引物對用于擴增推定的肌醇單酮異構酶蛋白(IoII)基因的至少一部分；

(b)使用所述步驟(a)的反應混合物進行所述樣品的所述核酸的PCR擴增；以及

(c)檢測所述步驟(b)的擴增，從而擴增的陽性檢出表明所述樣品中所述單核細胞增多性李斯特菌的存在。

2.根據權利要求1所述的方法，其中步驟(a)包括用于擴增SEQ ID NO：1的合適的引物對。

3.根據權利要求2所述的方法，其中用于擴增所述SEQ ID NO：1的核酸區域的所述引物對選自：

(A)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：8、以及SEQ ID NO：9和SEQ IDNO：10。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述反應混合物還包含用于各個待檢測核酸區域的至少一種核酸探針。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述至少一種核酸探針選自SEQ ID NO：11、12、13、14、15和16。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述至少一種核酸探針中的每一者包含可檢測的標記。

7.根據權利要求1所述的方法，其中所述樣品包括食物樣品或環境樣品。

8.一種引物，其包含基于BLASTN比對方法與SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9或10中所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。

9.根據權利要求8所述的引物，其中所述引物包含SEQ ID NO：2、3、4、5、6、7、8、9或10中所示的多核苷酸序列。

10.一種單核細胞增多性李斯特菌血清型檢測序列，其包括基于所述BLASTN比對方法與SEQ ID NO：1中所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。

11.根據權利要求10所述的單核細胞增多性李斯特菌血清型檢測序列，其包括SEQ ID NO：1中所示的多核苷酸序列。

12.一種分離的多核苷酸，其包含基于所述BLASTN比對方法與SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16中所示的多核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。

13.根據權利要求12所述的分離的多核苷酸，其中所述分離的多核苷酸包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ IDNO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ IDNO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16中所示的多核苷酸序列。

14.一種用于進行PCR的復制組合物，其包含：

(a)選自下列的一組引物對：

(i)SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：7；

(ii)SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5；

(iii)SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5；

(iv)SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6；

(v)SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：8；以及

(vi)SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10。