[發明專利]在微生物中產生油的方法

有效

• 申請號: 201580038746.4
• 申請日: 2015-05-21
• 公開（公告）號: CN106795539B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 孫志勇;羅伯托·E·阿門塔;麥西亞·瓦倫蒂恩
• 申請（專利權）人: 瑪拉可再生能源公司
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12N1/00;C12N1/10;C12P7/40
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

本文提供了用于產生一種或多種多不飽和脂肪酸的方法。所述方法包括以下步驟：提供能夠產生多不飽和脂肪酸的微生物、提供包含高濃度的一種或多種碳源、低pH或兩者的培養基以及在所述培養基中在足以產生所述一種或多種多不飽和脂肪酸的條件下培養所述微生物。還提供了培養一種或多種微生物的方法。所述方法包括在以第一濃度水平包含第一量的一種或多種碳源的培養基中培養所述微生物、監測碳源濃度，直至所述碳源濃度減小至低于所述第一濃度水平，以及向所述培養基添加第二量的一種或多種碳源以將所述碳源濃度增加至第二濃度水平。

相關申請的交叉引用

本申請要求2014年5月22日提交的美國臨時申請號62/001,912的優先權，所述申請以引用的方式整體并入本文。

背景

在通過真核微生物的發酵產生油的領域中，某些策略已經被建立并被廣泛接受。避免營養物質抑制并實現高細胞濃度的一個這種策略為使用補料分批發酵，其中以增量添加主要底物(主要為碳源)，以維持連續供給，同時避免發酵培養基中底物的高濃度。然而，補料分批發酵通常需要底物補料方案的仔細計劃以及集中的實時發酵監測和控制，這要求廣泛的人力并且可能導致發酵操作的高失敗率。

與工業規模的發酵相關的另一個顯著成本包括與滅菌相關的程序。這些成本包括昂貴的壓力容器發酵罐和在線蒸汽滅菌(steam-in-place)系統以及用于產生蒸汽的相關操作成本。

概述

本文提供了用于產生一種或多種多不飽和脂肪酸的方法。所述方法包括以下步驟：提供能夠產生多不飽和脂肪酸的微生物、提供包含高濃度的一種或多種碳源、低pH或兩者的培養基以及在所述培養基中在足以產生所述一種或多種多不飽和脂肪酸的條件下培養所述微生物。

還提供了減少一種或多種微生物的非無菌培養物的污染的方法。所述方法包括在以下條件下培養所述微生物：(i)在高濃度的一種或多種碳源存在下，(ii)在低pH條件下或(iii)其組合，其中所述培養減少了包含所述微生物的所述非無菌培養物的污染。

提供了培養一種或多種微生物的方法。所述方法包括在以第一濃度水平包含第一量的一種或多種碳源的培養基中培養所述微生物、監測碳源濃度，直至所述碳源濃度減小至低于所述第一濃度水平，以及向所述培養基添加第二量的一種或多種碳源以將所述碳源濃度增加至第二濃度水平。

附圖簡述

圖1為示出在2升(L)發酵期間的ONC-T18細胞濃度(生物量(“X”))和總脂肪酸含量(TFA％)的時間分布的圖。

圖2為示出在5L發酵期間的ONC-T18細胞濃度(生物質(“X”))和總脂肪酸含量(TFA％)的時間分布的圖。

圖3為示出在30L發酵期間的ONC-T18細胞濃度(生物質(“X”))和總脂肪酸含量(TFA％)的時間分布的圖。

圖4為示出在使用相同發酵培養基配方(ONC配方)的平行高葡萄糖發酵期間的ONC-T18和ATCC20888細胞濃度的時間分布的圖。

圖5為示出在使用針對ONC-T18的ONC發酵培養基配方和針對ATCC20888的不同發酵培養基配方的平行高葡萄糖發酵期間的ONC-T18和ATCC20888細胞濃度的時間分布的圖。

圖6為示出在30L高葡萄糖多批次發酵期間的ONC-T18細胞濃度(生物質(“X”))和葡萄糖濃度的時間分布的圖。圖6和圖3示出來自相同的30L發酵的數據。

圖7為示出pH對ONC-T18在高葡萄糖多批次發酵條件下生長的影響的圖。

圖8為示出在不同pH條件下和使用高葡萄糖多批次發酵生長的ONC-T18的脂肪酸分布的圖。

圖9為示出在低pH條件下的ONC-T18培養物的污染減少的圖。

詳述