[發(fā)明專利]雙順反子細菌表達系統(tǒng)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580037078.3
• 申請日: 2015-07-09
• 公開（公告）號: CN106661588B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發(fā)明（設計）人: 沙爾頓爾·薩盧西;布拉杰什·瓦爾什尼;薩德希巴布·索拉帕內(nèi)尼
• 申請（專利權）人: 魯平有限公司
• 主分類號: C12N15/67
• 分類號: C12N15/67;C12N15/70;C12P21/02
• 代理公司: 北京清亦華知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 宋融冰

1.一種用于產(chǎn)生抗體或其片段的方法，包括以下步驟：

(i)用由雙順反子表達系統(tǒng)組成的單一載體轉化宿主細胞；

(ii)在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)過轉化的細菌細胞以表達作為包涵體的所述抗體或其片段；

(iii)進行所述包涵體的溶解；

(iv)進行所述抗體或其片段的重折疊，

其中所述雙順反子表達系統(tǒng)包含：

a)第一順反子，包含與編碼所述抗體或其片段的重鏈的多核苷酸序列可操作地連接的T7啟動子；

b)第二順反子，包含與編碼所述抗體或其片段的輕鏈的多核苷酸序列可操作地連接的阿拉伯糖啟動子；

其中所述第一順反子和所述第二順反子位于所述單一載體中，并且表達作為所述包涵體的所述抗體或其片段；

其中所述重鏈和所述輕鏈以等摩爾表達水平同時表達。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中所述細菌宿主細胞是大腸桿菌。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中所述雙順反子表達系統(tǒng)包含SEQ ID no 19所示的核苷酸序列。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中所述方法用于產(chǎn)生雷珠單抗，并且包括以下步驟：

(i)用由所述雙順反子表達系統(tǒng)組成的所述單一載體轉化大腸桿菌；

(ii)在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)經(jīng)過轉化的細胞，其中所述第一順反子表達作為所述包涵體的雷珠單抗的重鏈并且所述第二順反子表達作為所述包涵體的雷珠單抗的輕鏈；

(iii)進行所述包涵體的溶解；

(iv)在合適的條件下進行所述包涵體的重折疊以獲得功能性雷珠單抗，

其中所述第一順反子包含與編碼所述雷珠單抗的重鏈的多核苷酸序列可操作地連接的T7啟動子，并且所述第二順反子包含與編碼所述雷珠單抗的輕鏈的多核苷酸序列可操作地連接的阿拉伯糖啟動子；并且

所述雷珠單抗的重鏈與所述雷珠單抗的輕鏈以等摩爾表達水平同時表達。