[發明專利]定量肽或蛋白質分析

有效

• 申請號: 201580030382.5
• 申請日: 2015-06-09
• 公開（公告）號: CN106662591B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: J.P.哈尼;C.L.埃蒂內;S.侯;E.拉加;R.賈納帕蒂
• 申請（專利權）人: 皮爾斯生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N23/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 周蓉;黃希貴

1.一種用于測定樣品中的肽或蛋白質濃度的直接方法，所述方法包含

（a）將所述樣品與在含10%至50%量的乙腈的水溶液中包含復合物的定量分析試劑組合物組合以形成混合物，其中所述復合物具有下式：

；

（b）在足以形成彩色復合物的條件下培育混合物；以及

（c）在450 nm到500 nm處測量彩色復合物的吸光度作為樣品中的肽或蛋白質濃度的直接指示物。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述方法包括在步驟(a)中將所述樣品與包含在50%乙腈/水中的該復合物的定量分析試劑組合物組合以形成混合物。

3.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其進一步包含在（c）之后通過比較直接測量到的吸光度與含有已知濃度的標準物的至少一種樣品的吸光度來測定所述樣品中的肽或蛋白質濃度。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述標準物選自由以下組成的群組：肽、肽混合物或蛋白質消化物。

5.根據權利要求1所述的方法，其在所述樣品的質譜分析之前進行。

6.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中（a）中的所述試劑組合物進一步包含酒石酸鹽和硫酸銅。

7.根據權利要求6所述的方法，其中，所述酒石酸鹽以從5.7 mM至22.7 mM的范圍內的濃度存在，所述復合物以從0.04 M至0.1 M的范圍內的濃度存在，以及所述硫酸銅以從0.25M至0.5 M的范圍內的濃度存在。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述培育溫度是在室溫到45℃的范圍內。

9.根據權利要求1所述的方法，其中所述培育溫度是在19℃到22℃的范圍內。

10.根據權利要求1所述的方法，其中所述培育溫度是約37℃。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述培育溫度是約45℃。

12.根據權利要求1所述的方法，其中所述樣品體積在5 μl到20 μl的范圍內。

13.根據權利要求1所述的方法，其中所述樣品體積在10 μl到20 μl的范圍內。

14.根據權利要求1所述的方法，其中所述樣品體積不超過200 μl。

15.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中所述樣品包含多種肽。

16.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中吸光度通過自動化微量培養板讀取器測定。

17.根據權利要求1至2中任一項所述的方法，其中所述樣品處于選自水性溶劑和有機溶劑的至少一種溶劑中。

18.根據權利要求1所述的方法，其進一步包含在（c）之后通過質譜分析來分析所述肽或蛋白質。

19.根據權利要求1所述的方法，其中所述定量分析試劑組合物含有除乙腈以外的有機溶劑或清潔劑中的至少一種以提高肽或蛋白質溶解度。

20.根據權利要求1所述的方法，其中所述試劑組合物是在約50%乙腈/水中的浴銅靈二磺酸二鈉鹽水合物。