[發(fā)明專利]自身癌抗原特異性CD8+ T細(xì)胞的分離及增殖方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201580001522.6
• 申請日: 2015-03-11
• 公開（公告）號: CN105473731B
• 公開（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 權(quán)炳世;姜鉉貴;金光揮;金榮雨;金永昊;樸丙圭;樸相潤;樸商在;嚴(yán)炫皙;吳好植;劉憲;李敦吉;李承勛;李映宙;李振洙;崔范奎
• 申請（專利權(quán)）人: 國立癌Center
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;C12N5/0783
• 代理公司: 北京派特恩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11270
• 代理人: 景鵬;姚開麗

本發(fā)明涉及自身癌抗原特異性CD8⁺T細(xì)胞的分離及增殖方法，詳細(xì)地涉及如下方法及利用其的CD8⁺T細(xì)胞的大量增殖方法，在上述方法中，從存在于癌癥患者每個(gè)人的血液內(nèi)的自身癌抗原篩選由CD8⁺T細(xì)胞識別的表位，并利用已篩選的表位的肽來分離對自身癌抗原特異性的CD8⁺T細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，利用作為非外來抗原的存在于癌癥患者的每個(gè)人的血液的自身癌抗原CD8⁺T細(xì)胞表位的肽來可分離對自身癌抗原特異性的CD8⁺T細(xì)胞。因此，若利用識別自身癌抗原的T細(xì)胞，則可有效地選擇來源于癌癥患者本人的細(xì)胞的癌細(xì)胞來去除，因而可無副作用地應(yīng)用于癌癥的治療及改善。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及自身癌抗原特異性CD8⁺T細(xì)胞的分離及增殖方法，詳細(xì)地涉及如下方法及利用其的CD8⁺T細(xì)胞的大量增殖方法，在上述方法中，從存在于癌癥患者每個(gè)人的血液內(nèi)的自身癌抗原篩選由CD8⁺T細(xì)胞識別的表位，并利用已篩選的表位的肽來分離對自身癌抗原特異性的CD8⁺T細(xì)胞。

背景技術(shù)

CD8⁺T細(xì)胞與樹突細(xì)胞、CD4⁺T、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)之類的其他細(xì)胞相比，具有比較單純的功能，因而當(dāng)進(jìn)行抗癌免疫治療時(shí)，產(chǎn)生未期待的副作用的可能性小。通常，利用主要組織相容性復(fù)合體-I類/肽多聚體(MHC class I/peptide multimer)來分離抗原特異性CD8⁺T細(xì)胞，但在這種方法的情況下，存在細(xì)胞分離之后由細(xì)胞自殺導(dǎo)致的死亡率高，從而為了生產(chǎn)充分量的抗原特異性CD8⁺T細(xì)胞，有需要長時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)的缺點(diǎn)。因而代替刺激T細(xì)胞受體 (TCR，T cell receptor)的主要組織相容性復(fù)合體多聚體(MHC multimer)，需要可分離抗原特異性CD8⁺T細(xì)胞的替代標(biāo)記(surrogate marker)，對此本發(fā)明人很長時(shí)間進(jìn)行了與作為免疫調(diào)節(jié)蛋白的4-1BB(CD137)相關(guān)的研究。

眾所周知，4-1BB在由誘導(dǎo)性共刺激分子活性化的T細(xì)胞中表達(dá)，尤其，不僅增進(jìn)CD8⁺T細(xì)胞的活性，而且增加Bcl-2、Bcl-XL、Bfl-1等之類的抗-細(xì)胞死亡分子(anti-apoptotic molecules)的表達(dá)，來呈現(xiàn)抑制活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(AICD，activation-induced cell death)的功能。這種4-1BB刺激的多個(gè)特性是適合于癌癥治療的多個(gè)特性，基于此，利用動(dòng)物模型對利用抗-4-1BB mAb 的癌癥治療效果進(jìn)行驗(yàn)證。對此，本發(fā)明人利用在以前研究中，以抗原特異性活性化的CD8⁺T細(xì)胞的4-1BB的表達(dá)來確立了利用抗-4-1BB抗體的抗原特異性CD8⁺T細(xì)胞的分離及增殖方法(韓國登錄特許第10-0882445號)，但在抗體的情況下，體外(in vitro)及體內(nèi)(in vivo)半衰期長，并且通過Fc受體的信號傳遞結(jié)果和通過抗體識別的靶蛋白質(zhì)的信號傳遞的效果被合并，從而呈現(xiàn)整體結(jié)果。并且，對相同的抗原存在多種抗體的情況多，并且這些呈現(xiàn)相互稍不同的效果。為了克服這種局限點(diǎn)，利用作為五聚合體的COMP-4-1BBL蛋白質(zhì)來成功開發(fā)過分離及增殖抗原特異性CD8⁺T細(xì)胞的方法(韓國登錄特許第 10-1103603號)。

這兩種專利作為外來抗原的病毒抗原(EBV/LMP2A，CMV/pp65)特異性 CD8⁺T細(xì)胞分離/大量培養(yǎng)的技術(shù)，在體內(nèi)這些細(xì)胞的比率高，從而可比較容易體現(xiàn)。但大部分癌細(xì)胞由構(gòu)成我們身體的細(xì)胞形成，因而雖然是構(gòu)成我們身體的蛋白質(zhì)，但在正常細(xì)胞中以低的比率存在，并且在癌細(xì)胞中需要將識別過表達(dá)的自身癌抗原(self tumor Ag)的CD8⁺T細(xì)胞選擇性分離及大量培養(yǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題