[發(fā)明專利]蛋白A洗脫產(chǎn)物中雜質(zhì)的去除有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201580000852.3 | 申請日： | 2015-01-05 |
| 公開（公告）號： | CN105407905B | 公開（公告）日： | 2020-03-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | M·斯奈德 | 申請（專利權(quán)）人： | 生物輻射實驗室股份有限公司 |
| 主分類號： | A61K38/00 | 分類號： | A61K38/00;C07K1/00;C07K16/00 |
| 代理公司： | 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100 | 代理人： | 余穎;楊昀 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 蛋白 洗脫 產(chǎn)物 雜質(zhì) 去除 | ||
本發(fā)明提供缺乏抗體結(jié)合活性的含修飾蛋白A、蛋白G、蛋白L或蛋白A/G，以及這些含修飾蛋白用于純化抗體的方法。
相關(guān)專利申請的交叉引用
本申請要求基于2014年1月3日提交的第61/923,380號美國臨時申請的優(yōu)先權(quán)，該申請作為參考納入本文用于所有目的。
發(fā)明背景
蛋白A是一個41kD的胞壁蛋白，源自金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureas)，結(jié)合抗體Fc區(qū)的親和力高。例如，蛋白A結(jié)合人IgG1、IgG2和IgG4以及小鼠IgG2a和IgG2b的親和力高。蛋白A結(jié)合人IgM、IgA和IgE以及小鼠IgG3和IgG1的親和力中等。
蛋白G是一種免疫球蛋白結(jié)合蛋白，在C族和G族鏈球菌中表達。蛋白G結(jié)合的IgG亞類比蛋白A多。蛋白L最早分離自大消化鏈球菌(Peptostreptococcus magnus)表面，它也結(jié)合免疫球蛋白，通過與κ輕鏈之間的相互作用結(jié)合。
蛋白A/G一種重組融合蛋白，兼有蛋白A和蛋白G兩者的IgG結(jié)合域。蛋白A/G有來自蛋白A的四個Fc結(jié)合域和來自蛋白G的兩個。
上述各種蛋白質(zhì)都曾被記載用于純化免疫球蛋白，其中蛋白A最常用于抗體純化。一般說來，蛋白A、蛋白G、蛋白L或蛋白A/G用于在親和層析中結(jié)合樣品中的目標抗體?？贵w(結(jié)合至蛋白A、G、L或A/G)于是能與樣品中大多數(shù)其他成分分離，并可以選擇再用其他純化步驟進行純化。
發(fā)明概述
實施方式之一中，提供的是一種多肽，它含有缺乏抗體結(jié)合活性的含修飾蛋白G、蛋白L或蛋白A/G。一些實施方式中，所述含修飾蛋白G、蛋白L或蛋白A/G含有一個或多個修飾氨基酸，這些修飾封閉了抗體結(jié)合活性。一些實施方式中，所述含修飾蛋白G、蛋白L或蛋白A/G含有一個或多個含修飾賴氨酸系氨基酸(lysine amino acids)。一些實施方式中，所述含修飾賴氨酸系氨基酸是乙酰化賴氨酸。
一些實施方式中，所述含修飾蛋白G、蛋白L或蛋白A/G含有交聯(lián)在蛋白G、蛋白L或蛋白A/G上結(jié)合位點或結(jié)合位點附近的含F(xiàn)c片段的蛋白質(zhì)，由此空間上封閉了抗體結(jié)合活性。
一些實施方式中，所述含修飾蛋白G、蛋白L或蛋白A/G分別與抗體結(jié)合性蛋白G、蛋白L或蛋白A/G相比具有一處或多處氨基酸改變，由此使得這些多肽缺乏抗體結(jié)合活性而保留污染物結(jié)合活性。
一些實施方式中，所述含修飾蛋白G、蛋白L或蛋白A/G含有空間封閉的各自的野生型(或抗體結(jié)合性變體)，致使這些多肽缺乏抗體結(jié)合活性而保留污染物結(jié)合活性。
本發(fā)明還提供一種多肽，它包含缺乏抗體結(jié)合活性的修飾蛋白A，所述修飾蛋白A包含一個或多個封閉抗體結(jié)合活性的修飾氨基酸。一些實施方式中，修飾蛋白A包含一個或多個含修飾賴氨酸系氨基酸。一些實施方式中，含修飾賴氨酸系氨基酸是乙?；嚢彼?。
本發(fā)明還提供一種固相支持物或支持基質(zhì)，所述固相支持物或支持基質(zhì)連接含有0-30℃缺乏抗體結(jié)合活性的含修飾蛋白A、蛋白G、蛋白L或蛋白A/G的多肽。一些實施方式中，所述含修飾蛋白A、蛋白G、蛋白L或蛋白A/G含有一個或多個封閉抗體結(jié)合活性的修飾氨基酸。一些實施方式中，所述含修飾蛋白A、蛋白G、蛋白L或蛋白A/G含有一個或多個含修飾賴氨酸系氨基酸。一些實施方式中，所述含修飾賴氨酸系氨基酸是乙酰化賴氨酸。
一些實施方式中，含修飾蛋白A、蛋白G、蛋白L或蛋白A/G含有一個或多個與所述蛋白A、蛋白G、蛋白L或蛋白A/G交聯(lián)的含F(xiàn)c片段的蛋白質(zhì)，由此封閉了抗體結(jié)合活性。
一些實施方式中，含修飾蛋白A、蛋白G、蛋白L或蛋白A/G與各自的野生型(或抗體結(jié)合性變體)相比含有一處或多處氨基酸改變，由此使得這些多肽缺乏抗體結(jié)合活性而保留污染物結(jié)合活性。
一些實施方式中，支持基質(zhì)是珠、膜或纖維。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于生物輻射實驗室股份有限公司，未經(jīng)生物輻射實驗室股份有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201580000852.3/2.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
