[發(fā)明專(zhuān)利]一種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201511024430.8
• 申請(qǐng)日: 2015-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105441410B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳龍;王雙平
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 寧夏乙征生物工程有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N9/26
• 分類(lèi)號(hào): C12N9/26;C12R1/645
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供了一種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：(1)取細(xì)麗毛殼菌種接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得一級(jí)種子液；(2)將一級(jí)種子液接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)得二級(jí)種子液；(3)將二級(jí)種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，得到混合培養(yǎng)基，后添加蔗糖，流加鼠李糖，得到酶活達(dá)到500U/mL以上的發(fā)酵液；(4)將發(fā)酵液進(jìn)行過(guò)濾，對(duì)濾液超濾濃縮，得到酶活達(dá)到1250U/mL以上的鼠李糖苷酶酶液；(5)將鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進(jìn)行噴霧干燥，得到酶活達(dá)到3500U/mL以上的固體鼠李糖苷酶。上述鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，工藝簡(jiǎn)單、操作容易、生產(chǎn)效率高，且生產(chǎn)的鼠李糖苷酶活力高，穩(wěn)定性好，易于儲(chǔ)存。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及鼠李糖苷酶領(lǐng)域，特別是涉及一種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

鼠李糖苷酶是一種水解酶。鼠李糖苷酶的來(lái)源比較廣，廣泛分布于自然界的細(xì)菌和真菌中。國(guó)內(nèi)關(guān)于鼠李糖苷酶研究，主要集中在代謝產(chǎn)生的鼠李糖苷酶，國(guó)外研究相對(duì)較多，主要有黑曲霉、白曲霉、棘孢曲霉、青霉菌、擬桿菌屬和熱微菌門(mén)等。鼠李糖苷酶在實(shí)際工藝中具有很多潛在的應(yīng)用價(jià)值，如工業(yè)上用于去除柑桔汁中柚皮苷的苦味，將橘皮苷水解為鼠李糖和橘皮素糖苷等。其中橘皮素糖苷是工業(yè)生產(chǎn)甜味劑的重要前體物。另外，鼠李糖苷酶可以作用于萜烯基糖苷，在改善葡萄汁和飲料的香氣成分方面有很重要的應(yīng)用。它在食品、醫(yī)藥、飼料等行業(yè)中得到了廣泛應(yīng)用。其工業(yè)化生產(chǎn)是利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)，但該方法存在發(fā)酵活力低、產(chǎn)量低、生產(chǎn)成本高等限制性因素，故為了克服上述問(wèn)題，技術(shù)人員在應(yīng)用各種遺傳學(xué)手段提高微生物的生產(chǎn)性能方面，做了大量工作，而對(duì)通過(guò)培養(yǎng)方法的改進(jìn)來(lái)提高發(fā)酵性能方面所做的工作還有所欠缺。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種工藝簡(jiǎn)單、發(fā)酵活力高的鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法。

一種鼠李糖苷酶的生產(chǎn)方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取細(xì)麗毛殼菌種(Chaetomiumgracile)按5～20％的接種量接種于一級(jí)種子培養(yǎng)基中，在25～38℃培養(yǎng)10～30h，控制溶氧在60％以上，培養(yǎng)即得一級(jí)種子液；

(2)將所述一級(jí)種子液按5～20％的接種量接種于二級(jí)種子培養(yǎng)基中，在25～38℃培養(yǎng)10～30h，控制溶氧在60％以上，培養(yǎng)即得二級(jí)種子液；

(3)將所述二級(jí)種子液按5～20％的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25～38℃培養(yǎng)40～55h，控制溶氧在60％以上，得到混合培養(yǎng)基，后按每升混合培養(yǎng)基添加5～10g蔗糖的比例添加蔗糖，并開(kāi)始按每升混合培養(yǎng)基流加橘皮苷0.5～5g/小時(shí)的比例添加橘皮苷，同時(shí)控制pH為 4.5～5.5，培養(yǎng)70～96h后即得酶活達(dá)到500U/mL以上的鼠李糖苷酶發(fā)酵液，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為：橘皮苷60～80g/L、酵母抽提物10～15g/L、氯化鈉3～5g/L、磷酸二氫銨 2～3g/L、硫酸鎂0.5～1g/L、氯化鋅0.2～0.5g/L、丙酸鈣20～30g/L；

(4)將所述鼠李糖苷酶發(fā)酵液進(jìn)行過(guò)濾，除去菌體及其他微小顆粒，后對(duì)濾液超濾濃縮，直至得到酶活達(dá)到1250U/mL以上的鼠李糖苷酶酶液；

(5)將所述鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進(jìn)行噴霧干燥，即可得到酶活達(dá)到3500U/mL以上的固體鼠李糖苷酶；

其中，步驟(1)中的所述一級(jí)種子培養(yǎng)基和步驟(2)中的所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為：橘皮苷60～80g/L、酵母抽提物10～15g/L、氯化鈉3～5g/L、磷酸二氫銨2～3g/L、硫酸鎂0.5～1g/L、氯化鋅0.2～0.5g/L、丙酸鈣20～30g/L。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述一級(jí)種子培養(yǎng)基、所述二級(jí)種子培養(yǎng)基的成分都為：橘皮苷 60g/L、酵母抽提物15g/L、氯化鈉3g/L、磷酸二氫銨3g/L、硫酸鎂1g/L、氯化鋅0.2g/L、丙酸鈣20g/L。