[發(fā)明專利]一種鼠李糖苷酶的生產方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201511024430.8
• 申請日: 2015-12-31
• 公開（公告）號: CN105441410B
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設計）人: 陳龍;王雙平
• 申請（專利權）人: 寧夏乙征生物工程有限公司
• 主分類號: C12N9/26
• 分類號: C12N9/26;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種鼠李糖苷酶的生產方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)取細麗毛殼菌種(Chaetomiumgracile)按5～20％的接種量接種于一級種子培養(yǎng)基中，在25～38℃培養(yǎng)10～30h，控制溶氧在60％以上，培養(yǎng)即得一級種子液；

(2)將所述一級種子液按5～20％的接種量接種于二級種子培養(yǎng)基中，在25～38℃培養(yǎng)10～30h，控制溶氧在60％以上，培養(yǎng)即得二級種子液；

(3)將所述二級種子液按5～20％的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25～38℃培養(yǎng)40～55h，控制溶氧在60％以上，得到混合培養(yǎng)基，后按每升混合培養(yǎng)基添加5～10g蔗糖的比例添加蔗糖，并開始按每升混合培養(yǎng)基流加橘皮苷0.5～5g/小時的比例添加橘皮苷，同時控制pH為4.5～5.5，培養(yǎng)70～96h后即得酶活達到500U/mL以上的鼠李糖苷酶發(fā)酵液，其中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為：橘皮苷60～80g/L、酵母抽提物10～15g/L、氯化鈉3～5g/L、磷酸二氫銨2～3g/L、硫酸鎂0.5～1g/L、氯化鋅0.2～0.5g/L、丙酸鈣20～30g/L；

(4)將所述鼠李糖苷酶發(fā)酵液進行過濾，除去菌體及其他微小顆粒，后對濾液超濾濃縮，直至得到酶活達到1250U/mL以上的鼠李糖苷酶酶液；

(5)將所述鼠李糖苷酶酶液以淀粉為載體，進行噴霧干燥，即可得到酶活達到3500U/mL以上的固體鼠李糖苷酶；

其中，步驟(1)中的所述一級種子培養(yǎng)基和步驟(2)中的所述二級種子培養(yǎng)基的成分都為：橘皮苷60～80g/L、酵母抽提物10～15g/L、氯化鈉3～5g/L、磷酸二氫銨2～3g/L、硫酸鎂0.5～1g/L、氯化鋅0.2～0.5g/L、丙酸鈣20～30g/L。

2.根據權利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產方法，其特征在于，所述一級種子培養(yǎng)基、所述二級種子培養(yǎng)基的成分都為：橘皮苷60g/L、酵母抽提物15g/L、氯化鈉3g/L、磷酸二氫銨3g/L、硫酸鎂1g/L、氯化鋅0.2g/L、丙酸鈣20g/L。

3.根據權利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產方法，其特征在于，步驟(3)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的成分為：橘皮苷60g/L、酵母抽提物10g/L、氯化鈉5g/L、磷酸二氫銨3g/L、硫酸鎂0.5g/L、氯化鋅0.5g/L、丙酸鈣30g/L。

4.根據權利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產方法，其特征在于，步驟(3)中，通過添加氨水的方式控制pH為5.0～5.5。

5.根據權利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產方法，其特征在于，步驟(1)、(2)、(3)中控制溶氧的方法都為：在培養(yǎng)過程中，調整攪拌轉速或通入無菌空氣控制溶氧在60％以上。

6.根據權利要求1所述的鼠李糖苷酶的生產方法，其特征在于，步驟(4)中，將鼠李糖苷酶發(fā)酵液通過板框過濾方法，除去菌體及其他微小顆粒。