[發(fā)明專利]一種頭狀鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)絲裂霉素的培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201511016316.0
• 申請日: 2015-12-29
• 公開（公告）號: CN105441505B
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李小萍
• 申請（專利權(quán)）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/18;C12R1/465
• 代理公司: 寧夏專利服務中心 64100
• 代理人: 徐淑芬

本發(fā)明涉及一種頭狀鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)絲裂霉素的新型培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法，利用本發(fā)明中提供的培養(yǎng)基配方和發(fā)酵控制工藝，能夠提高絲裂霉素發(fā)酵單位，縮短發(fā)酵周期，降低發(fā)酵成本，并且最大限度的降低原輔料來源不受環(huán)境影響，保證其供應充足，實現(xiàn)絲裂霉素穩(wěn)定、高效的生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種頭狀鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)絲裂霉素的新型培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

絲裂霉素(Mitomycin)是一種廣譜抗腫瘤抗生素，自1956年Hata第一個從頭狀鏈霉菌的培養(yǎng)液中分離到絲裂霉素開始，由于它特殊的抗腫瘤作用引起人們廣泛的關(guān)注。

目前，國內(nèi)絲裂霉素的發(fā)酵生產(chǎn)采用二發(fā)酵模式，存在的主要問題有以下幾點：

1絲裂霉素發(fā)酵水平較低，一般控制在800u/ml左右。

2國內(nèi)外針對絲裂霉素的生產(chǎn)工藝文獻資料報道得較少。

3發(fā)酵生產(chǎn)絲裂霉素的培養(yǎng)基中加入葡萄糖，經(jīng)高溫滅菌，易導致部分葡萄糖碳化，降低總糖含量，影響發(fā)酵液質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種發(fā)酵工藝簡單，有效提高發(fā)酵單位，同時最大限度的降低原輔料對發(fā)酵單位的影響，降低生產(chǎn)成本，且原輔料來源不受環(huán)境影響，保證其供應充足，實現(xiàn)絲裂霉素穩(wěn)定、高效生產(chǎn)的頭狀鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)絲裂霉素的培養(yǎng)基。

本發(fā)明的另一目的是提供利用上述培養(yǎng)基生產(chǎn)絲裂霉素的培養(yǎng)方法。

為實現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為：

一種頭狀鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)絲裂霉素的培養(yǎng)基，包括種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，其特征在于

所述種子培養(yǎng)基的組成為：甘露醇4～8g/L、甘蔗糖蜜8～12g/L、麥芽糖5～ 9g/L、麥芽糖酶0.02～0.06g/L、蠶蛹粉4～8g/L、玉米漿10～14ml/L、玉米蛋白粉3～7g/L、硫酸銨3～7g/L、輕質(zhì)碳酸鈣1～5g/L；

所述發(fā)酵培養(yǎng)基組成為：甘露醇4～8g/L、甘蔗糖蜜11～15g/L、麥芽糖9～ 13g/L、麥芽糖酶0.04～0.08g/L、蠶蛹粉6～10g/L、玉米漿15～19ml/L、玉米蛋白粉5～9g/L、硫酸銨4～8g/L、輕質(zhì)碳酸鈣3～7g/L、磷酸鎂0.2～0.6g/L、氯化鈉0.3～0.7g/L、硫酸亞鐵0.01～0.05g/L、聚醚改性硅油0.03～0.07ml/L、維生素B6 0.05～0.09g/L、泛酸0.01～0.05g/L、氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯 0.5～1g/L。

一種利用上述培養(yǎng)基生產(chǎn)絲裂霉素的培養(yǎng)方法，其特征在于所述工藝步驟為：

1)種子培養(yǎng)：首先將種子培養(yǎng)基滅菌并冷卻至25～30℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經(jīng)培養(yǎng)好的頭狀鏈霉菌母瓶發(fā)酵液按照0.5～ 0.9L/m³的接種量接入該種子培養(yǎng)基中進行種子培養(yǎng)，至菌體濃度35～40％、pH 值6～7、培養(yǎng)時間40～50h時移種；

2)發(fā)酵培養(yǎng)：先將發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，冷卻至20～25℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養(yǎng)好的種子液移入發(fā)酵培養(yǎng)基進行發(fā)酵培養(yǎng)，移種比例控制在9～11％，至菌體濃度35～40％、還原糖＜2.0g/L、氨基氮＜15mg/100ml、化學效價＞ 1300u/mL、pH6.0～7.5、培養(yǎng)時間200～220h時終止發(fā)酵。

滅菌后的種子培養(yǎng)基的質(zhì)量要求：氨基氮40～60mg/100ml、還原糖50～ 70g/L、pH：6.5～7.5；

滅菌后的發(fā)酵培養(yǎng)基的質(zhì)量要求：氨基氮70～80mg/100ml、還原糖70～ 90g/L、pH：6～7。