[發明專利]一種頭狀鏈霉菌發酵生產絲裂霉素的培養基和培養方法

有效

• 申請號: 201511016316.0
• 申請日: 2015-12-29
• 公開（公告）號: CN105441505B
• 公開（公告）日: 2019-01-29
• 發明（設計）人: 李小萍
• 申請（專利權）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P17/18;C12R1/465
• 代理公司: 寧夏專利服務中心 64100
• 代理人: 徐淑芬

1.一種頭狀鏈霉菌發酵生產絲裂霉素的培養基，包括種子培養基和發酵培養基，其特征在于

所述種子培養基的組成為：甘露醇4～8g/L、甘蔗糖蜜8～12g/L、麥芽糖5～9g/L、麥芽糖酶0.02～0.06g/L、蠶蛹粉4～8g/L、玉米漿10～14ml/L、玉米蛋白粉3～7g/L、硫酸銨3～7g/L、輕質碳酸鈣1～5g/L；

所述發酵培養基組成為：甘露醇4～8g/L、甘蔗糖蜜11～15g/L、麥芽糖9～13g/L、麥芽糖酶0.04～0.08g/L、蠶蛹粉6～10g/L、玉米漿15～19ml/L、玉米蛋白粉5～9g/L、硫酸銨4～8g/L、輕質碳酸鈣3～7g/L、磷酸鎂0.2～0.6g/L、氯化鈉0.3～0.7g/L、硫酸亞鐵0.01～0.05g/L、聚醚改性硅油0.03～0.07ml/L、維生素B6 0.05～0.09g/L、泛酸0.01～0.05g/L、氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯0.5～1g/L。

2.一種利用權利要求1所述培養基生產絲裂霉素的培養方法，其特征在于其工藝步驟為：

1）種子培養：首先將種子培養基滅菌并冷卻至25～30℃，并用無菌空氣保壓，然后在火焰保護下，將已經培養好的頭狀鏈霉菌母瓶發酵液按照0.5～0.9L/m³的接種量接入該種子培養基中進行種子培養，至菌體濃度35～40%、pH值6～7、培養時間40～50h時移種；

2）發酵培養：先將發酵培養基滅菌，冷卻至20～25℃，并用無菌空氣保壓，然后將培養好的種子液移入發酵培養基進行發酵培養，移種比例控制在9～11%，至菌體濃度35～40%、還原糖＜2.0g/L、氨基氮＜15mg/100ml、化學效價＞1300u/mL、pH6.0～7.5、培養時間200～220h時終止發酵。

3.按照權利要求2所述的培養方法，其特征是：

滅菌后的種子培養基的質量要求：氨基氮40～60mg/100ml、還原糖50～70g/L、pH：6.5～7.5；

滅菌后的發酵培養基的質量要求：氨基氮70～80mg/100ml、還原糖70～90g/L、pH：6～7。

4.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述培養好的母瓶發酵液質量要求為：pH6～8；菌體濃度10～20%；鏡檢無雜菌；搖瓶發酵單位800～1000u/ml。

5.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述種子培養條件為：罐壓0.03～0.05MPa；罐溫28～29℃；空氣流量：0～10h，采用空氣攪拌代替機械攪拌；11h～移種：30～50m³/h；攪拌轉速70～80r/min。

6.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于所述發酵培養條件為：

a 溫度：采用變溫控制方法，0～60h：培養溫度29～30℃；61～170h：培養溫度28～29℃；171～發酵培養結束，培養溫度26～27℃；

b 攪拌轉速：采用變頻攪拌控制方法，0～60h：轉速控制在90r/min；61～170h：轉速控制在120r/min；171h～發酵結束：轉速控制在80r/min；

c 壓力控制：罐壓0.05～0.06MPa；

d pH控制：發酵過程中pH控制在6～7；

e 空氣流量：0～60h：150～200m³/h；61～170h：250～300m³/h；171h～發酵結束：100～150m³/h；

f 溶氧控制：

發酵前60h內，不控制溶氧；

61～170h，溶氧控制在30%以上；

171～發酵結束：溶氧控制在40%以上。

7.按照權利要求2所述的培養方法，其特征在于在發酵過程中采用流加法進行補料，補料包括補蛋白胨、補水、補糖和pH控制，其中

a 補蛋白胨工藝控制：

發酵前60h不用進行補油，

發酵時間在61～170h，當氨基氮含量低于40mg/100ml，補入蛋白胨，控制氨基氮為40～60mg/100ml，每隔6～8h檢測發酵液氨基氮含量，

發酵時間在171～200h，當氨基氮含量低于20mg/100ml，補入蛋白胨，控制氨基氮含量為20～40mg/100ml，每隔6～8h檢測發酵液氨基氮含量，

發酵時間在201h～發酵結束，當氨基氮含量低于10mg/100ml，補入蛋白胨，控制氨基氮含量為10～15mg/100ml，每隔6～8h檢測發酵液氨基氮含量；

b補水工藝控制：

發酵前60h不用進行補水，

發酵時間在61～120h，當菌體濃度高于45%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在40～45%，每隔6～8h檢測發酵液菌體濃度，

發酵時間在121～200h，當菌體濃度高于40%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在35～40%，每隔6～8h檢測發酵液菌體濃度，

發酵時間在201h～發酵結束，當菌體濃度高于35%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在30～35%，每隔6～8h檢測發酵液菌體濃度；

c 補入麥芽糖控制：

發酵前60h，還原糖含量不進行控制，

發酵61h至120h：還原糖含量＜50g/L時，補入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在50～55g/L，

發酵121h至200h：還原糖含量＜30g/L時，補入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在30～35g/L，

發酵201h至發酵結束：還原糖含量＜5g/L時，補入已滅菌的麥芽糖溶液，使還原糖的含量控制在5～10g/L；

上述麥芽糖溶液中加入麥芽糖酶，其濃度控制在0.001～0.003%。