[發明專利]大型溞測定新煙堿類農藥毒性的方法

在審

• 申請號: 201511008386.1
• 申請日: 2015-12-29
• 公開（公告）號: CN105651984A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 陳昂;劉勇;張德詠;羅香文;嚴清平;劉建宇;羅源華
• 申請（專利權）人: 湖南省植物保護研究所
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所 43008
• 代理人: 趙洪;黃藝平

技術領域

本發明涉及養殖技術領域，尤其涉及一種大型溞測定新煙堿類農藥毒性的方法。

背景技術

大型溞是世界范圍內廣泛分布的甲殼綱枝角類無脊椎動物，它以浮游植物為食，同時又 是魚類和大型無脊椎動物的餌料，是水生態系統中物質循環和能量流動的重要環節。由于其 分布廣、繁殖快、生活周期短、易于培養和馴化，對環境中的毒物敏感且實驗方法簡便，因 此受到眾多國家毒理學工作者的重視。現已成為一種標準試驗生物，被廣泛用于水生生物毒 理學的研究中。

目前，已經廣泛采用大型溞進行農藥環境安全性評價的研究，但是采用大型溞作為新煙 堿類農藥毒性篩選模型的研究較少，缺乏相關的研究數據評估模型的實用性和可靠性。因此， 提供一種易操作、實用性強的大型溞篩選新煙堿類農藥毒性的方法尤其重要。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種大型溞測定新煙堿類農藥毒 性的方法，具有操作簡便、實用性強、檢測速度快，精確度高等優勢。

為解決上述技術問題，提供了一種大型溞測定新煙堿類農藥毒性的方法，包括以下步驟：

(1)將新煙堿類農藥溶解制成農藥儲備液；

(2)將所述農藥儲備液與ElendtM₄培養液混合配制成梯度濃度的混合液，將所述混合 液做為大型溞的生活用水，持續培養48h，培養過程中，每隔24h時記錄大型溞的生物效應 參數和所述混合液的理化參數；

(3)根據大型溞的生物效應參數和農藥儲備液的理化參數計算農藥對半數抑制濃度 EC₅₀，判斷新煙堿類農藥的毒性。

上述的方法，優選的，所述步驟(2)中所述大型溞為來源于同一母系的孤雌繁殖3代以 上，出生時間小于24h的非頭胎健康幼溞。

上述的方法，優選的，在所述步驟(2)進行的過程中，所述大型溞不喂食；所述大型溞 不離開水，轉移時用滴管轉移。

上述的方法，優選的，所述步驟(2)中所述ElendtM₄培養液為空氣曝氣泵曝氣處理 24h以上的ElendtM₄培養液。

上述的方法，優選的，所述ElendtM₄培養液的pH為6.0～9.0，硬度為140～250mg/L， 溶解氧≥3mg/L。

上述的方法，優選的，所述步驟(2)中，所述生物效應參數為大型溞的抑制率；所述理 化參數為混合液的水溫、pH值、溶解氧含量；判斷所述大型溞抑制的標準為輕晃燒杯，溞在 15s內不游動視為活動抑制，但允許附肢微弱擺動。

上述的方法，優選的，所述步驟(2)中，所述培養過程控制水溫為18℃～22℃、每日 光照16h、溶解氧濃度不低于3.0mg/L。

上述的方法，優選的，所述新煙堿類農藥的毒性的判斷標準為：EC₅₀＞10.0mga.i./L表 示低毒，1.00mga.i./L＜EC₅₀≤10.0mga.i./L表示中毒，0.100mga.i./L＜EC₅₀≤1.00mga.i./L 表示高毒，EC₅₀≤0.100mga.i./L表示劇毒。

上述的方法，優選的，所述步驟(1)具體為：將新煙堿類農藥溶解于ElendtM₄培養液 中，制成農藥儲備液；所述大型溞測定新煙堿類農藥毒性的方法還設有空白對照組；所述空 白對照組以ElendtM₄培養液為大型溞的生活用水。

上述的方法，優選的，所述空白對照組和所述溶劑對照組的受抑制率不能超過10％則證 明實驗結果可信。

上述的方法，優選的，所述步驟(1)具體為：將新煙堿類農藥溶解于ElendtM₄培養液 和有機溶劑的混合液中，制成農藥儲備液；所述大型溞測定新煙堿類農藥毒性的方法還設有 空白對照組和溶劑對照組；所述空白對照組以ElendtM₄培養液為大型溞的生活用水，所述溶 劑對照組為丙酮和吐溫-80的混合溶液，所述溶劑對照組的混合溶液中丙酮和吐溫-80的含量 應為所述步驟(2)中丙酮和吐溫-80使用量的最大值，吐溫-80的質量濃度≤0.100g/L，所述 丙酮的質量濃度≤0.100mL/L。