[發明專利]一種檢測CYP2D6_C2850T基因多態性的引物及其方法

在審

• 申請號: 201511006951.0
• 申請日: 2015-12-30
• 公開（公告）號: CN105543347A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 梁耀銘;于世輝;趙薇薇;燕啟江;胡昌明;羅錦霞
• 申請（專利權）人: 廣州金域檢測科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

1.一種檢測CYP2D6_C2850T基因多態性的引物，其特征在于：包括巢式PCR擴增引物和 SNaPshotPCR引物；所述巢式PCR擴增引物包括巢式A輪PCR擴增引物和巢式B輪PCR擴增引 物；所述巢式A輪擴增引物為：針對CYP2D6的上游引物5’-CCAGAAGGCTTTGCAGGCTTCA-3’和 下游引物5’-CTGAGCCCTGGGAGGTAGGTAG-3’；所述巢式B輪PCR擴增引物為：針對CYP2D6_ C2850T的上游引物5’-GCTCACGCTGCACATCCGGA-3’和下游引物5’-GGGCAAGGGTGGTGGGTTGA -3’；所述SNaPshotPCR引物為：針對CYP2D6_C2850T的SNaPshotPCR引物5’- TTTTTTTTTTTTTTCAGGTCAGCCACCACTATGC-3’。

2.一種檢測CYP2D6_C2850T基因多態性的方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1提取DNA樣品；

S2采用權利要求1所述的巢式A輪PCR擴增引物進行PCR擴增，對A輪PCR擴增產物進行純 化；

S3以巢式A輪PCR擴增產物為模板采用權利要求1所述的巢式B輪PCR擴增引物進行多重 PCR擴增；

S4采用權利要求1所述的SNaPshotPCR引物進行SNaPshotPCR擴增，對擴增產物進行 純化；

S5毛細管電泳技術進行檢測，對檢測結果進行分析，確定SNP位點及其基因型。

3.根據權利要求2所述的檢測CYP2D6_C2850T基因多態性的方法，其特征在于：所述步 驟S1中的DNA樣品為EDTA抗凝外周血的DNA樣品。

4.根據權利要求2所述的檢測CYP2D6_C2850T基因多態性的方法，其特征在于：所述步 驟S2中的巢式A輪PCR擴增反應條件包括：階段1：98℃3min；階段2：98℃10s；階段3：72℃ 3min；階段4：返回到階段2，24個循環；階段5：72℃5min；階段6：25℃保溫。

5.根據權利要求2所述的檢測CYP2D6_C2850T基因多態性的方法，其特征在于：所述步 驟S3中的巢式B輪PCR擴增反應條件包括：階段1：98℃3min；階段2：98℃10s；階段3：58℃ 30s；階段4：72℃1min；階段5：返回到階段2，29個循環；階段6：72℃5min；階段7：25℃保 溫。

6.根據權利要求2所述的檢測CYP2D6_C2850T基因多態性的方法，其特征在于：所述步 驟S4中的SNaPshotPCR擴增反應條件包括：階段1：96℃10s；階段2：55℃5s；階段3：60℃ 30s；階段4：返回到階段1，25個循環；階段5：4℃保溫。

7.根據權利要求2所述的檢測CYP2D6_C2850T基因多態性的方法，其特征在于：所述步 驟S5中采用GENEMAPPERIDV4.1軟件對檢測結果進行分析。

8.根據權利要求1所述的CYP2D6_C2850T基因多態性的引物在制備檢測CYP2D6_C2850T 基因多態性試劑中的用途。