[發明專利]一種檢測ALDH2基因*2多態性的引物與方法

在審

• 申請號: 201511006901.2
• 申請日: 2015-12-30
• 公開（公告）號: CN105506089A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 燕啟江;趙薇薇;胡昌明;梁耀銘;于世輝;郭周萍
• 申請（專利權）人: 廣州金域體檢門診部有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，尤其涉及一種檢測ALDH2基因*2多態性的引物與 方法。

背景技術

乙醛脫氫酶（ALDH2基因編碼）是酒精代謝的關鍵酶，其突變可影響酒精代謝進而 引起乙醛等有害物質的堆積，影響身體健康。ALDH2基因*2多態性(NM_000690.3:c.1510G> A,p.Glu504Lys)可導致乙醛脫氫酶酶活性顯著降低，乙醛代謝至乙酸速度較慢，促進了體 內乙醛的堆積。ALDH2基因*2基因多態性可導致飲酒后體內乙醛堆積，當血液中乙醛達到一 定濃度時，會出現面紅、頭痛、心動過速、呼吸苦難等不適，表現為對酒精的不耐受性，稱為 面紅反應。

硝酸甘油是心絞痛急性發作時的常規首選藥物，但該藥的臨床療效常因人而異。 研究顯示，中國漢族人群中，硝酸甘油含服無效的比例高達25%以上，而ALDH2基因*2多態性 與部分國人含服硝酸甘油治療心絞痛無效相關。硝酸甘油主要的藥理作用是通過舒張血 管，降低心臟前后負荷，擴張冠狀動脈，減少心肌耗氧，從而緩解心絞痛癥狀，而其舒張血管 作用主要是通過釋放NO所介導的。研究發現，乙醛脫氫酶是使硝酸甘油活化并釋放NO的關 鍵酶，硝酸甘油需先在體內經乙醛脫氫酶生物轉化，然后才能釋放出有藥理活性的一氧化 氮(NO)，發揮其抗心絞痛作用。ALDH2基因*2多態性導致乙醛脫氫酶酶活性顯著降低，從而 影響了硝酸甘油治療心絞痛的有效率。

檢測ALDH2基因*2多態性對硝酸甘油的臨床用藥及指導人們健康飲酒具有重要的 意義。中國專利申請201510085568.2公開了一種檢測ADH1B基因的單一核苷多型性R49H的 基因型和ALDH2基因的單一核苷多型性E487K的基因型的引物組和定序引物，但其用于檢測 ALDH2基因*2和ADH1B基因*2多態性準確度不足。現有技術缺少一種檢測特異性和靈敏度 高、準確性和精密性好的ALDH2基因*2多態性檢測引物及其方法。

發明內容

為解決現有技術中存在的問題，本發明提供一種檢測ALDH2基因*2多態性的引物 與方法，具有檢測特異性和靈敏度高，準確性和精密性好等優點，實現了ALDH2基因*2多態 性的檢測。本發明檢測的位點為ALDH2基因*2(NM_000690.3:c.1510G>A，p.Glu504Lys， rs671)。

本發明提供一種檢測ALDH2基因*2多態性的引物，包括PCR擴增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR擴增引物為上游引物5’-TGGTGGCTACAAGATGTCG-3’(SEQIDNO.1)和下游 引物5’-GCAGGTCCCACACTCACA-3’(SEQIDNO.2)；所述SNaPshotPCR為針對5’- ACGGGCTGCAGGCATACACT-3’(SEQIDNO.3)。

采用上述技術方案，本發明提供的檢測ALDH2基因*2多態性的引物，可以實現 ALDH2基因*2多態性的特異性檢測，準確性好。

相應地，本發明還提供一種檢測ALDH2基因*2多態性的方法，包括如下步驟：

S1、提取DNA樣品；

S2、以步驟S1所述的DNA樣本為模板，利用權利要求1中所述的PCR擴增引物進行多重 PCR擴增，并對擴增產物進行純化，；

S3、以步驟S2所述的純化后的PCR擴增產物為模板，利用權利要求1中所述的SNaPshot PCR引物進行SNaPshotPCR擴增，并對SNaPshotPCR擴增產物進行純化；

S4、采用毛細管電泳技術對步驟S3所述的純化后的SNaPshotPCR擴增產物進行檢測， 并對檢測結果進行分析，確定SNP位點及其基因型。

優選地，所述步驟S1中的DNA樣品為EDTA抗凝外周血的DNA樣品。

優選地，所述步驟S2中的多重PCR擴增反應條件包括：98℃預變性3min，98℃變性 10s，58℃退火30s，72℃延伸1min，進行29個循環，最后72℃延伸5min，結束后25℃保溫。

優選地，所述步驟S3中的SNaPshotPCR擴增反應條件包括：96℃變性10s，55℃退 火5s，60℃延伸30s，進行25個循環，結束后4℃保溫。

優選地，所述步驟S4中，采用GENEMAPPERIDV4.1軟件對檢測結果進行分析。