[發(fā)明專利]一種檢測ALDH2基因*2多態(tài)性的引物與方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201511006901.2
• 申請日: 2015-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN105506089A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 燕啟江;趙薇薇;胡昌明;梁耀銘;于世輝;郭周萍
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州金域體檢門診部有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

1.一種檢測ALDH2基因*2多態(tài)性的引物，其特征在于：包括PCR擴(kuò)增引物和SNaPshot PCR引物；所述PCR擴(kuò)增引物為上游引物5’-TGGTGGCTACAAGATGTCG-3’和下游引物5’- GCAGGTCCCACACTCACA-3’；所述SNaPshotPCR引物為5’-ACGGGCTGCAGGCATACACT-3’。

2.一種檢測ALDH2基因*2多態(tài)性的方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1、提取DNA樣品；

S2、以步驟S1所述的DNA樣本為模板，利用權(quán)利要求1中所述的PCR擴(kuò)增引物進(jìn)行多重 PCR擴(kuò)增，并對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化；

S3、以步驟S2所述的純化后的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，利用權(quán)利要求1中所述的SNaPshot PCR引物進(jìn)行SNaPshotPCR擴(kuò)增，并對SNaPshotPCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行純化；

S4、采用毛細(xì)管電泳技術(shù)對步驟S3所述的純化后的SNaPshotPCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測， 并對檢測結(jié)果進(jìn)行分析，確定SNP位點(diǎn)及其基因型。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測ALDH2基因*2多態(tài)性的方法，其特征在于：所述步驟S1中 的DNA樣品為EDTA抗凝外周血的DNA樣品。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測ALDH2基因*2多態(tài)性的方法，其特征在于：所述步驟S2中 的多重PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件包括：98℃預(yù)變性3min，98℃變性10s，58℃退火30s，72℃延伸 1min，進(jìn)行29個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5min，結(jié)束后25℃保溫。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測ALDH2基因*2多態(tài)性的方法，其特征在于：所述步驟S3中 的SNaPshotPCR擴(kuò)增反應(yīng)條件包括：96℃變性10s，55℃退火5s，60℃延伸30s，進(jìn)行25個(gè)循 環(huán)，結(jié)束后4℃保溫。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測ALDH2基因*2多態(tài)性的方法，其特征在于：所述步驟S4中， 采用GENEMAPPERIDV4.1軟件對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測ALDH2基因*2多態(tài)性的引物在制備檢測ALDH2基因*2多態(tài) 性試劑中的用途。