[發(fā)明專利]一種裂谷熱病毒IgG抗體的間接免疫熒光檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201511002956.6
• 申請日: 2015-12-28
• 公開（公告）號: CN105738624B
• 公開（公告）日: 2018-07-10
• 發(fā)明（設計）人: 李深偉;田楨干;楊志俊;周嫻;張子龍;李平
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國上海出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/533
• 代理公司: 上海泰能知識產(chǎn)權代理事務所 31233
• 代理人: 宋纓;孫健

本發(fā)明涉及一種快速、簡便、靈敏的裂谷熱病毒(Rift Valley fever Virus)IgG抗體的間接免疫熒光檢測方法。本發(fā)明的檢測方法原理是以間接免疫熒光法檢測人抗裂谷熱病毒病毒糖蛋白抗體。載玻片上是包被能表達裂谷熱病毒糖蛋白的293F細胞，陽性對照或陽性樣品中抗糖蛋白抗體在結合到細胞表面后，用熒光染料標記二抗捕獲后在熒光顯微鏡下觀察，可見綠色的熒光細胞，判定為裂谷熱病毒IgG抗體陽性。若樣本中無裂谷熱病毒抗體，細胞不顯示熒光。檢測方法包括如下步驟：293F細胞載波片的制備，載波片上加入樣本，熒光標記二抗的結合，洗滌，熒光檢測，結果判定。本發(fā)明能對裂谷熱病毒進行快速靈敏的檢測，操作簡便，通過本發(fā)明可大幅度提高出入境口岸一線檢驗檢疫人員的檢測效率，對防控外來烈性傳染病的輸入具有重要意義。

技術領域

本發(fā)明涉及體外診斷試劑技術領域，具體涉及一種裂谷熱病毒IgG抗體的間接免疫熒光檢測方法。

背景介紹

隨著全球經(jīng)濟一體化和貿(mào)易自由化，國外的醫(yī)學媒介生物通過先進的交通工具和國際貿(mào)易，可以迅速把傳染病從一個國家或地區(qū)傳向全球，造成國際間傳播。近年來,烈性病毒性傳染病在世界各國頻頻暴發(fā)流行,對人類健康帶來嚴重威脅,給社會造成巨大經(jīng)濟損失。這些烈性病毒性傳染病的頻發(fā)給我們敲響了警鐘,加強對其的研究和監(jiān)測以及早預防控制是至關重要的。

裂谷熱(Rift Valley fever)是由裂谷熱病毒引起的人畜共通病，以蚊蟲類為媒介或接觸傳播的急性病毒性感染病。早在1912年在肯尼亞就有關于裂谷熱的報告，但直到1930年在肯尼亞裂谷綿羊、牛群發(fā)生廣泛流行此病才受到矚目。歷史上最出名的動物大流行是發(fā)生在1950年的肯尼亞，疫情持續(xù)約一年，根據(jù)估計當時約有10萬只綿羊死亡。1977年在埃及亦發(fā)現(xiàn)裂谷熱病毒，爆發(fā)了動物和人的大規(guī)模流行，猜測可能是因為從蘇丹進口的牲畜受到感染。西非首次爆發(fā)人的裂谷熱流行在1987年，其原因可能是塞內(nèi)加爾河的整建計劃導致地勢較低的區(qū)淹水，改變動物和人之間的交互作用，造成裂谷熱病毒傳播至人類。2000年9月，沙特阿拉伯和也門爆發(fā)流行，是其首次在出現(xiàn)在非洲以外的確定案例。2006年11月，肯尼亞再度傳出爆發(fā)裂谷熱疫情，截至2007年1月7日，已有大約75人因此死亡，另外有183人受到感染。2007年1月20日，報告指出疫情已經(jīng)由肯尼亞傳至索馬里，在當?shù)卦斐?4人死亡。

裂谷熱有人體疫苗，然而直到2010年為止，尚未廣泛使用。一旦感染，則沒有特定的治療方法。裂谷熱病毒屬于白蛉熱病毒屬。此疾病由接觸染病動物的血液、生乳、或是受到已感染蚊子的叮咬而傳播。牛、綿羊、山羊與駱駝等動物也會被裂谷熱感染，最常見的病媒為蚊子(通常為黑斑蚊屬)。目前尚無發(fā)現(xiàn)人傳人的病例。所以切斷傳播途徑是最有效的預防人類感染裂谷熱的方式。在診斷該疾病方面，可借由尋找血液中病毒或病毒所產(chǎn)生的抗體而確診。

裂谷熱病毒在我國尚未流行,但隨著我國商貿(mào)、旅游業(yè)的快速發(fā)展,境內(nèi)外人員交往日益密切,以及動物的進口等影響,烈性病毒輸入的危險性日益增高，因此,盡快建立快速簡便、特異敏感的檢測方法防范裂谷熱病毒輸入并控制其暴發(fā)流行具有重要意義。對裂谷熱病毒的檢測技術的國內(nèi)目前研究不多，目前已知的相關研究均采用核酸方法對病毒進行檢測，均不夠簡便、快速。本發(fā)明提供的IgG抗體間接免疫熒光法可檢測人抗裂谷熱病毒糖蛋白抗體，為裂谷熱病毒的檢測提供了快速，簡便，靈敏的免疫熒光檢測方法，本發(fā)明可大幅度提高進出口口岸一線檢驗檢疫人員的檢測效率，最大限度地防止外來輸入性傳染病的發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種快速、靈敏的裂谷熱病毒IgG抗體的間接免疫熒光檢測方法。本發(fā)明的裂谷熱病毒IgG抗體的間接免疫熒光檢測方法，包括如下步驟：

1.表達裂谷熱病毒糖蛋白的293F細胞載波片的制備: