[發明專利]一種雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201511000683.1
• 申請日: 2015-12-29
• 公開（公告）號: CN105497888B
• 公開（公告）日: 2018-07-27
• 發明（設計）人: 何平有;韓佳麗;鄒立宏;馬明;柳珊;郁宏偉;劉濤;梁武;朱秀同;楊保收
• 申請（專利權）人: 瑞普（保定）生物藥業有限公司
• 主分類號: A61K39/245
• 分類號: A61K39/245;A61K47/34;A61K47/42;A61K47/32;A61P35/00
• 代理公司: 石家莊冀科專利商標事務所有限公司 13108
• 代理人: 馬世敏

本發明公開了一種雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗及其制備方法，屬于生物技術領域。本發明雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗由病毒液與耐熱保護劑混合凍干而成；其耐熱保護劑組方包括：蔗糖8～10%、聚乙烯吡咯烷酮2～4%、聚賴氨酸3～6%、酶解明膠1～2%、乳蛋白水解物2～6%、谷氨酰胺0.4～1%、L－精氨酸0.05～0.5%、甘油1～4%、蘆布若爾2～5%；本發明通過胰酶冷消化、接毒后添加輔助液提高生產效率、降低成本；通過添加耐熱保護劑，降低了病毒在冷凍和真空干燥過程中損傷，提高了產品在保存和使用中的穩定性；本發明方法制備的雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗，實現了儲運過程中冷藏保存，保存期延長到2～8℃保存36個月。

技術領域

本發明涉及一種耐熱保護劑活疫苗及其制備方法，尤其是一種雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗及其制備方法，屬于生物技術領域。

背景技術

馬立克氏病是雞的一種淋巴組織增生性腫瘤病，目前是危害養雞業健康發展的三大主要疫病(馬立克氏病、雞新城疫及雞傳染性法氏囊病)之一，感染的雞群出現較高的發病率和死亡率，成為一種世界性疾病。其病理表現為外周神經淋巴樣細胞浸潤和增大，引起肢(翅)麻痹，并在性腺、虹膜、各種臟器、肌肉和皮膚等部位出現腫瘤樣的病灶。

疫苗免疫是防控該病的重要手段。國內常用的弱毒疫苗有兩種：一種為病毒與細胞結合的馬立克氏病液氮苗，它的需用液氮保存，運輸及保存條件苛刻使疫苗的長期保存和運輸受到限制；另一種為病毒脫離細胞的火雞皰疹病毒凍干活疫苗(HVT)，保存相對較易，使用廣泛。

目前，馬立克氏病火雞皰疹弱毒疫苗采用雞胚成纖維細胞生產，大多制成凍干活疫苗。現有的凍干疫苗生產工藝存在著生產成本較高、保存困難和免疫效果不盡理想等問題。因此，研發一種生產成本相對較低、適于大規模生產、保護功能強的馬立克氏病活疫苗耐熱凍干保護技術顯得尤為重要。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服已有技術之缺陷，提供一種雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗及其制備方法，制備的雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗具有耐熱性能好、保護功能強的特點。

本發明的目的通過以下技術方案實現的：

一種雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗，是由雞馬立克氏病病毒與耐熱保護劑混合凍干而成；所述耐熱保護劑是由以質量體積百分含量計的下列組分構成：蔗糖8～10％，聚乙烯吡咯烷酮2～4％，聚賴氨酸3～6％，酶解明膠1～2％，乳蛋白水解物2～6％，谷氨酰胺0.4～1％，L－精氨酸0.05～0.5％，甘油1～4％，蘆布若爾2～5％，余量為水。

一種雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗的制備方法，包括如下步驟：

a.細胞制備：用EDTA-胰酶消化SPF雞胚成纖維細胞，并加入細胞生長液，在36～37℃溫度下培養20～28小時，至生成細胞單層；所述EDTA-胰酶的濃度為質量體積百分含量為1％～3％。

b.接毒：接種雞馬立克氏病病毒，加入細胞培養液體積10％的輔助培養液，按100～200萬個/毫升復種雞胚成纖維細胞，36～37℃繼續培養2～4日。

c.收獲與凍干：細胞病變達75％～85％時，棄去90％細胞培養液，轉動細胞培養瓶，使細胞全部脫離瓶壁，收集、低速離心，取沉淀細胞并稱重，加入耐熱保護劑，進行勻漿和超聲波裂解，定量分裝和冷凍真空干燥，制成雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗。

上述雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗的制備方法，步驟a中EDTA-胰酶的消化溫度為2～8℃，消化時間為10～18小時。

上述雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗的制備方法，步驟b中輔助培養液為含有水解乳蛋白、精氨酸和谷氨酰胺的水溶液。

上述雞馬立克氏病耐熱保護劑活疫苗的制備方法，步驟c中耐熱保護劑的加入量為每克沉淀細胞加入100～300ml。

本發明所述疫苗及其制備方法具有以下特點：