[發明專利]小柴胡顆粒復方制劑的指紋圖譜檢測方法

有效

• 申請號: 201510975885.1
• 申請日: 2015-12-23
• 公開（公告）號: CN105486771B
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 肖斌;賴小紅;文煥松;白蘭輝;劉丁
• 申請（專利權）人: 成都普思生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳開磊

1.一種小柴胡顆粒復方制劑的指紋圖譜檢測方法，所述復方制劑配方組分包括柴胡、黃芩、黨參、生姜、甘草，其特征在于，所述指紋圖譜檢測方法包括：

取黃芩素、黃芩苷、黨參炔苷、柴胡皂苷C、漢黃芩素、6-姜辣素、甘草酸銨、柴胡皂苷A和柴胡皂苷B₂配置成對照品混合溶液；

取待測試小柴胡顆粒復方制劑提取制成供試品溶液，配置所述供試品溶液包括：將所述待測試小柴胡顆粒研成細粉，再加入甲醇，進行超聲提取，再放冷后過濾，將過濾后的濾液濃縮至干，殘渣用甲醇定容溶解，搖勻后離心，取上清液作為所述供試品溶液；

吸取對照品混合溶液注入高效液相色譜儀，記錄對照色譜圖；

吸取所述供試品溶液，注入高效液相色譜儀，記錄供試品色譜圖；以及

比較所述供試品色譜圖與所述對照色譜圖，以黃芩素峰為參照峰，計算所述對照色譜圖和所述供試品色譜圖中多個特征峰的相對保留時間，相對峰面積以及峰面積比值；以及利用所述相對保留時間，相對峰面積以及峰面積比值比較所述對照色譜圖與所述供試品色譜圖的相似度；

高效液相色譜儀的檢測器為紫外檢測器；檢測波長190nm～400nm；流速：0.5～1.5ml/min；色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填料；柱溫25～35℃；色譜洗脫步驟中通過以乙腈為流動相A，以甲醇為流動相B，以0.2％磷酸溶液為流動相C，進行梯度洗脫，隨著時間的變化三種組分的百分比隨梯度洗脫程序發生變化；

其中，在0～52min內，按照體積比計的乙腈的百分比從15％變化至28％，甲醇的百分比從12％變化至15％，0.2％磷酸溶液的百分比從73％變化至57％；

在52～56min內，按照體積比計的乙腈的百分比從28％變化至35％，甲醇的百分比恒定為15％，0.2％磷酸溶液的百分比從57％變化至50％；

在56～78min內，按照體積比計的乙腈的百分比從35％變化至37.5％，甲醇的百分比恒定為15％，0.2％磷酸溶液的百分比從50％變化至47.5％；

在78～82min內，按照體積比計的乙腈的百分比從37.5％變化至80％，甲醇的百分比從15％變化至10％，0.2％磷酸溶液的百分比從47.5％變化至10％；

在82～92min內，按照體積比計的乙腈的百分比恒定為80％，甲醇的百分比恒定為10％，0.2％磷酸溶液的百分比恒定為10％；

在92～93min內，按照體積比計的乙腈的百分比從80％變化至15％，甲醇的百分比從10％變化至12％，0.2％磷酸溶液的百分比從10％變化至73％；

在93～105min內，按照體積比計的乙腈的百分比恒定為15％，甲醇的百分比恒定為12％，0.2％磷酸溶液的百分比恒定為73％。

2.根據權利要求1所述的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，所述黃芩素、所述黃芩苷、所述黨參炔苷、所述柴胡皂苷C、所述漢黃芩素、所述6-姜辣素、所述甘草酸銨、所述柴胡皂苷A和所述柴胡皂苷B₂通過加入甲醇進行溶解并定容配置成所述對照品混合溶液。

3.根據權利要求1所述的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，利用所述高效液相色譜儀記錄所述對照色譜圖和所述供試品色譜圖，以乙腈為流動相A，以甲醇為流動相B，以低濃度酸水為流動相C，進行梯度洗脫。

4.根據權利要求1所述的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，吸取所述供試品溶液，注入高效液相色譜儀，記錄所述供試品色譜圖包括：取多個批次的所述供試品溶液依次進樣，得到多個供試品色譜圖。

5.根據權利要求4所述的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，所述多個供試品色譜圖之間對應的相對保留時間的相對標準偏差小于等于20％。

6.根據權利要求4所述的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，所述指紋圖譜檢測方法檢測小柴胡顆粒復方制劑相似度應為0.8-1.0小柴胡顆粒復方制劑。