[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)三唑醇的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510973025.4
• 申請(qǐng)日: 2015-12-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105572348B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳黎;范子彥;曹東山;魯亞輝;潘立寧;胡斌;唐綱嶺;劉惠民;朱亮
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院;國(guó)家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心;北京勤邦生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/543
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/543
• 代理公司: 鄭州中民專(zhuān)利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

1.一種檢測(cè)三唑醇的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于：包括包被有三唑醇偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、三唑醇單克隆抗體、酶標(biāo)記抗抗體、三唑醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、洗滌液、復(fù)溶液；所述三唑醇偶聯(lián)抗原是由三唑醇半抗原與載體蛋白偶聯(lián)得到，所述載體蛋白為甲狀腺蛋白、牛血清白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白或血藍(lán)蛋白；所述三唑醇半抗原是由三唑酮與氨基己酸在有機(jī)堿1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯的催化下進(jìn)行酮胺的縮合反應(yīng)得到，分子結(jié)構(gòu)式為：

所述三唑醇單克隆抗體是以三唑醇偶聯(lián)抗原作為免疫原制備獲得，

所述酶標(biāo)記抗抗體中的抗抗體為羊抗鼠抗抗體。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述三唑醇半抗原的合成方法為：取1.0 g三唑酮加乙醇溶解，加入0.35 g 1,8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯，攪拌，再加入0.87 g氨基己酸水溶液，加熱回流反應(yīng)12 h，停止反應(yīng)，旋蒸，除去乙醇，加水和1.3 g氫氧化鉀，震蕩，加乙酸乙酯萃取，分去有機(jī)相，水相調(diào)節(jié)pH值到4，加乙酸乙酯萃取，有機(jī)相水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥蒸干，得到淺黃色油狀物，二氯甲烷/石油醚=1:10重結(jié)晶，得到述三唑醇半抗原產(chǎn)物。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述酶標(biāo)記抗抗體的標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶或細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶，當(dāng)標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶時(shí)，底物顯色液A液為過(guò)氧化氫或過(guò)氧化脲，底物顯色液B液為鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺，終止液為1~2 mol/L的硫酸或鹽酸緩沖液；當(dāng)標(biāo)記酶為細(xì)菌提取堿性磷酸酯酶時(shí)，底物顯色液為對(duì)硝基磷酸鹽緩沖液，終止液為1~2 mol/L氫氧化鈉溶液。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述洗滌液為pH值為7.4，含有0.05%吐溫-20、0.01‰硫柳汞防腐劑的0.02 mol/L磷酸鹽緩沖液；所述復(fù)溶液為pH值為7.0、0.1 mol/L的磷酸鹽緩沖液，洗滌液中的百分比為重量體積百分比，單位g/mL。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述三唑醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度分別為0 μg/L、1 μg/L、3 μg/L、9 μg/L、27 μg/L、81 μg/L。

6.一種利用權(quán)利要求1所述試劑盒檢測(cè)煙葉樣品中三唑醇?xì)埩袅康姆椒ǎ涮卣髟谟冢喊ㄒ韵虏襟E：

（1）樣品前處理；

（2）用試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；

（3）分析檢測(cè)結(jié)果。