[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定、抗干擾能力強(qiáng)的血清磷脂檢測試劑及檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510971392.0
• 申請日: 2015-12-22
• 公開（公告）號: CN105543336B
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李志明;甘宜梧;趙新;李靜
• 申請（專利權(quán)）人: 山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司
• 主分類號: C12Q1/44
• 分類號: C12Q1/44;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及血清磷脂檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種血清磷脂檢測試劑，試劑R1中含有緩沖液，磷脂酶D，DAOS，抗壞血酸氧化酶，膽紅素氧化酶，聚乙二醇6000，蔗糖，黃原膠，甘露醇，海藻糖，BSA，聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚（Pluranic L64），防腐劑；試劑R2中含有緩沖液，4?氨基氨替吡啉，過氧化物酶，膽堿氧化酶，聚乙二醇6000，蔗糖，黃原膠，甘露醇，海藻糖，BSA，聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚（Pluranic L64），防腐劑。采用HEPES緩沖液及Trinder反應(yīng)新色原DAOS，添加多種穩(wěn)定劑，顯著改善了試劑的穩(wěn)定性；通過添加膽紅素氧化酶和抗壞血酸氧化酶，可以有效避免膽紅素和抗壞血酸的干擾，大大增強(qiáng)試劑的抗干擾能力。此外，優(yōu)選的新型非離子表面活性劑聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚（Pluranic L64）的加入可防止反應(yīng)體系渾濁，增強(qiáng)底物的穩(wěn)定性，提高試劑的抗干擾能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及血清磷脂檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種血清磷脂檢測試劑，還涉及使用此檢測試劑的檢測方法。

背景技術(shù)

血清磷脂主要包括卵磷脂、溶血卵磷脂、神經(jīng)磷脂和腦磷脂等四部分。臨床工作中一般只測定血清總磷脂，血清磷脂的增高見于糖尿病、腎病綜合癥、慢性出血性貧血、肝硬化、肝壞死、膽道阻塞、甲狀腺功能減退、原發(fā)性高血壓、梅毒等；減退見于甲狀腺功能亢進(jìn)、急性感染性發(fā)熱、營養(yǎng)不良性肝硬化等。

目前，血清總磷脂的檢測有化學(xué)法和酶法等，現(xiàn)以酶法最為常用?；瘜W(xué)法，方法穩(wěn)定，但操作繁瑣，試劑對操作人員危害較大，易造成環(huán)境污染，且難以實現(xiàn)自動化操作。而酶法試劑，操作簡便，靈敏度高，適用自動化分析，但試劑穩(wěn)定性稍差，容易受膽紅素和抗壞血酸等干擾物質(zhì)干擾。

鑒于此，本發(fā)明在酶法的基礎(chǔ)上采用Trinder反應(yīng)新色原DAOS，添加穩(wěn)定劑聚乙二醇6000、蔗糖、甘露醇、海藻糖、BSA、黃原膠等，有效提高了試劑的穩(wěn)定性；并且通過添加膽紅素氧化酶和抗壞血酸氧化酶，可以有效膽紅素和抗壞血酸的干擾，大大增強(qiáng)試劑的抗干擾能力。此外，優(yōu)選的新型非離子表面活性劑聚氧丙烯氧化乙烯甘油醚(Pluranic L64)的加入可防止反應(yīng)體系渾濁，增強(qiáng)底物的穩(wěn)定性，提高試劑的抗干擾能力。該試劑操作簡便快速，適用于自動化分析，是一種更加穩(wěn)定、抗干擾能力強(qiáng)的血清血清磷脂(PLIP)試劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種用于檢測血清磷脂(PLIP)的試劑及使用該試劑檢測血清磷脂含量的方法。該試劑盒采用酶法，可以有效檢測血清磷脂的含量，抗干擾能力強(qiáng)，穩(wěn)定性好等優(yōu)點。

基本原理：

磷脂在磷脂酶D的作用水解生成膽堿和磷脂酸，膽堿被膽堿氧化酶氧化生成過氧化氫，過氧化氫與4-氨基安替比林、DAOS反應(yīng)生成藍(lán)色染料。此染料在600nm有最大吸收峰，吸收強(qiáng)度與血清中磷脂含量成正比。

注：DAOS：N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3'5-二甲氧基苯胺鈉鹽

4-AA：4-氨基氨替吡啉

POD：過氧化物酶

本發(fā)明是通過以下步驟得到的：

一種血清磷脂檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1和試劑R2的組成如下：

試劑R1中含有

2)試劑R2的組分為：

所述的血清磷脂檢測試劑，試劑R1中緩沖液為25℃，pH為7.2的HEPES緩沖液。