[發明專利]一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法

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• 申請號: 201510971138.0
• 申請日: 2015-12-20
• 公開（公告）號: CN105543208A
• 公開（公告）日: 2016-05-04
• 發明（設計）人: 任嬌艷;康小燕;劉丹;鄭亞美
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N11/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

1.一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，該方法利用化學共沉淀法制備Fe₃O₄磁性顆粒，并以Fe₃O₄磁性顆粒為磁核通過乳化交聯法制備磁性殼聚糖微球，用環氧氯丙烷對磁性殼聚糖微球表面進行活化，用于黃嘌呤氧化酶的固定化研究。

2.根據權利要求1所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，所述化學共沉淀法制備Fe₃O₄磁性顆粒的步驟為：將摩爾比為3:1~1:1的FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O混合，氮氣保護下滴加NaOH溶液，至溶液變為黑亮色，30~50°C下攪拌30~40min，結束后加入0.5~1mL油酸，于70~80oC水浴振蕩下熟化30~60min，超聲10~20min；冷卻后用磁鐵吸附，用無水乙醇和去離子水洗滌，干燥，得Fe₃O₄磁性顆粒。

3.根據權利要求2所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，所述FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O的摩爾比為4:3~2:1。

4.根據權利要求1所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，所述乳化交聯法制備磁性殼聚糖微球的步驟為：制備10~15mg/mL的殼聚糖醋酸溶液，在溶液中加入Fe₃O₄磁性顆粒，超聲分散30~40min；分散結束后，加入80~120mL液體石蠟、1.5~3mL吐溫-80、1.5~3gSpan-80，在40~60oC水浴條件下攪拌30~40min；逐滴加入1~5ml戊二醛溶液，升溫至60~70oC，攪拌1~1.5h，逐滴滴加NaOH溶液調節pH至9.0~11.0，置于70~75oC恒溫振蕩1~1.5h，超聲10~15min；冷卻后用磁鐵吸附分離，用無水乙醇和去離子水洗滌，干燥，得磁性殼聚糖微球。

5.根據權利要求4所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，殼聚糖與Fe₃O₄磁性顆粒的質量比為2:1~1:2，水相與油相的體積比為1:3~1:6，戊二醛的體積分數為10~50%。

6.根據權利要求1所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，所述對磁性殼聚糖微球表面進行活化的步驟為：稱取磁性殼聚糖微球于離心管內，加入NaOH溶液與環氧氯丙烷溶液，攪拌混勻，加入NaBH₄溶液，恒溫水浴振蕩反應3~5h。

7.根據權利要求6所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，所述NaOH溶液的濃度為0.2~1.6mol/L，環氧氯丙烷溶液的體積分數為10~50%，NaBH₄溶液的濃度為0.3~1.5g/L。

8.根據權利要求1所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，所述黃嘌呤氧化酶的固定化步驟為：稱取0.01~0.05g經過活化的磁性殼聚糖微球于離心管中，加入100~500μL黃嘌呤氧化酶酶液，2~4mLTris-HCl緩沖液，在水浴震蕩下進行固定化，得磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶。

9.根據權利要求8所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法，其特征在于，所述固定化時間為30~180min，固定化溫度為25~60oC，固定化pH為6.0~10.0。