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[發明專利]一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法在審

專利信息
申請號: 201510971138.0 申請日: 2015-12-20
公開(公告)號: CN105543208A 公開(公告)日: 2016-05-04
發明(設計)人: 任嬌艷;康小燕;劉丹;鄭亞美 申請(專利權)人: 華南理工大學
主分類號: C12N11/14 分類號: C12N11/14;C12N11/10
代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 代理人: 何淑珍
地址: 510640 廣*** 國省代碼: 廣東;44
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摘要:
搜索關鍵詞: 一種 磁性 聚糖 固定 黃嘌呤 氧化酶 制備 方法
【權利要求書】:

1.一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,該方法利用化學共沉淀法制備Fe3O4磁性顆粒,并以Fe3O4磁性顆粒為磁核通過乳化交聯法制備磁性殼聚糖微球,用環氧氯丙烷對磁性殼聚糖微球表面進行活化,用于黃嘌呤氧化酶的固定化研究。

2.根據權利要求1所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,所述化學共沉淀法制備Fe3O4磁性顆粒的步驟為:將摩爾比為3:1~1:1的FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O混合,氮氣保護下滴加NaOH溶液,至溶液變為黑亮色,30~50°C下攪拌30~40min,結束后加入0.5~1mL油酸,于70~80oC水浴振蕩下熟化30~60min,超聲10~20min;冷卻后用磁鐵吸附,用無水乙醇和去離子水洗滌,干燥,得Fe3O4磁性顆粒。

3.根據權利要求2所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,所述FeCl3·6H2O和FeCl2·4H2O的摩爾比為4:3~2:1。

4.根據權利要求1所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,所述乳化交聯法制備磁性殼聚糖微球的步驟為:制備10~15mg/mL的殼聚糖醋酸溶液,在溶液中加入Fe3O4磁性顆粒,超聲分散30~40min;分散結束后,加入80~120mL液體石蠟、1.5~3mL吐溫-80、1.5~3gSpan-80,在40~60oC水浴條件下攪拌30~40min;逐滴加入1~5ml戊二醛溶液,升溫至60~70oC,攪拌1~1.5h,逐滴滴加NaOH溶液調節pH至9.0~11.0,置于70~75oC恒溫振蕩1~1.5h,超聲10~15min;冷卻后用磁鐵吸附分離,用無水乙醇和去離子水洗滌,干燥,得磁性殼聚糖微球。

5.根據權利要求4所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,殼聚糖與Fe3O4磁性顆粒的質量比為2:1~1:2,水相與油相的體積比為1:3~1:6,戊二醛的體積分數為10~50%。

6.根據權利要求1所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,所述對磁性殼聚糖微球表面進行活化的步驟為:稱取磁性殼聚糖微球于離心管內,加入NaOH溶液與環氧氯丙烷溶液,攪拌混勻,加入NaBH4溶液,恒溫水浴振蕩反應3~5h。

7.根據權利要求6所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,所述NaOH溶液的濃度為0.2~1.6mol/L,環氧氯丙烷溶液的體積分數為10~50%,NaBH4溶液的濃度為0.3~1.5g/L。

8.根據權利要求1所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,所述黃嘌呤氧化酶的固定化步驟為:稱取0.01~0.05g經過活化的磁性殼聚糖微球于離心管中,加入100~500μL黃嘌呤氧化酶酶液,2~4mLTris-HCl緩沖液,在水浴震蕩下進行固定化,得磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶。

9.根據權利要求8所述的一種磁性殼聚糖微球固定化黃嘌呤氧化酶的制備方法,其特征在于,所述固定化時間為30~180min,固定化溫度為25~60oC,固定化pH為6.0~10.0。

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