[發明專利]一種從鰻魚骨中提取的鰻魚小分子肽及其提取方法

在審

• 申請號: 201510961837.7
• 申請日: 2015-12-22
• 公開（公告）號: CN105506043A
• 公開（公告）日: 2016-04-20
• 發明（設計）人: 潘愛國
• 申請（專利權）人: 潘愛國
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從鰻魚骨中提取鰻魚小分子活性肽的方法，其特征在于，包括 如下步驟：(1)鰻魚骨處理；(2)低溫粉碎處理；(3)細胞溶 出處理；(4)生物酶解處理；(5)后處理。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：(1) 鰻魚骨處理：將新鮮的鰻魚骨清洗干凈，破碎，在蒸煮罐中，采用 溫度為120-150℃的溫度，0.13-0.15Mpa的壓力蒸煮6-10h，骨渣 排出，得到骨湯，速凍后，形成冷凍骨湯油凍塊，貯存于-18℃的 冷凍庫內備用；(2)低溫粉碎處理：采用粉碎機在低溫對所述的 冷凍骨湯油凍塊進行低溫粉碎，粉碎溫度控制在0-4℃之間，將所 述的冷凍骨湯油凍塊粉碎為顆粒直徑在0.02-0.1毫米的冷凍骨湯 油凍塊顆粒；(3)細胞溶出處理：采用常壓下4℃無氧水對粉碎 的冷凍骨湯油凍塊顆粒進行浸滲水處理，水飽和時間為6-8小時， 所述無氧水以完全淹沒原料為準；然后快速深度冷凍與融凍處理， 其中深冷凍處理時間為1-2h，冷凍溫度為零下22-25℃，緊接著融 凍，即以常壓下4℃水浴對處于深冷凍的冷凍骨湯油凍塊顆粒進行 快速融冰，融冰處理時間為3-5h；重復所述的快速深度冷凍與融 凍處理過程2-3次，細胞壁結構被破壞，有效物質溶出，形成鰻魚 寡肽骨湯；(4)生物酶解處理：將所述鰻魚寡肽骨湯導入水解罐 中，加入復合酶，所述的復合酶制備方法如下，先將草芽孢桿菌、 雙歧螺桿菌、鼠李糖乳桿菌、光合菌、地衣芽孢桿菌置于三角瓶中 進行培養，培養的溫度為28-33℃，在200-250rpm/min下培養 25-35h，使菌體或者孢子濃度達到1×10¹⁴個/升(CFU/L)，制得 發酵劑，然后向發酵劑中加入營養素，控制營養素的重量是所述發 酵劑重量的1/5-1/8，所述的營養素為麥芽汁，即得到所述的復合 酶，按照鰻魚寡肽骨湯與復合酶1000-1200∶1的重量比加入所述的 復合酶進行生物酶解處理，在所述生物酶解過程中保持水解罐中 pH為6.8-7.0，所述酶解溫度為60℃，所述酶解時間為13-21℃， 得到初級鰻魚小分子活性肽；(5)后處理：將所述的初級鰻魚小 分子活性肽滅酶，快速升溫至180-185℃并保持20-25s，然后 50-60℃/s降溫至60℃使酶失活；然后采用高速離心機將酶解液以 60000-80000r/min的速度離心3-5min，將上層液和中層液合并輸入 稀釋罐體內，即酶解分離液，下層液被分離出去，然后采用熱隔膜 低溫濃縮技術進行濃縮，濃縮溫度為45-50℃，真空度為 0.4-2.0MPa，將濃縮液輸送到200-220℃的離心噴霧干燥塔內干燥 成粉沫，即得到所述的鰻魚小分子活性肽。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(1)中采用溫度為 130℃的溫度，0.14Mpa的壓力蒸煮7h，骨渣排出，得到骨湯，速 凍后，形成冷凍骨湯油凍塊，貯存于-18℃的冷凍庫內備用；步驟 2)中，粉碎溫度控制在2℃，將所述的冷凍骨湯油凍塊粉碎為顆 粒直徑在0.05毫米的冷凍骨湯油凍塊顆粒。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(3)中細胞溶出處 理：采用常壓下4℃無氧水對粉碎的冷凍骨湯油凍塊顆粒進行浸滲 水處理，水飽和時間為7小時，所述無氧水以完全淹沒原料為準； 然后快速深度冷凍與融凍處理，其中深冷凍處理時間為2h，冷凍 溫度為零下25℃，緊接著融凍，即以常壓下4℃水浴對處于深冷凍 的冷凍骨湯油凍塊顆粒進行快速融冰，融冰處理時間為3h；重復 所述的快速深度冷凍與融凍處理過程3次，細胞壁結構被破壞，有 效物質溶出，形成鰻魚寡肽骨湯。

5.如權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(4)中在三角瓶中 進行培養，培養的溫度為30℃，在200rpm/min下培養28h，使菌 體或者孢子濃度達到1×10¹⁴個/升(CFU/L)，按照鰻魚寡肽骨湯 與復合酶1000∶1的重量比加入所述的復合酶進行生物酶解處理， 在所述生物酶解過程中保持水解罐中pH為7.0，所述酶解溫度為 60℃，所述酶解時間為21℃，得到初級鰻魚小分子活性肽。