[發明專利]一種魔芋基因組含量值的快速測定方法在審
| 申請號： | 201510959683.8 | 申請日： | 2015-12-21 |
| 公開（公告）號： | CN105606518A | 公開（公告）日： | 2016-05-25 |
| 發明（設計）人： | 盛佳婧;刁英;鐘琳;胡中立 | 申請（專利權）人： | 武漢大學 |
| 主分類號： | G01N15/14 | 分類號： | G01N15/14 |
| 代理公司： | 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 常海濤 |
| 地址： | 430072 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 魔芋 基因組 量值 快速 測定 方法 | ||
1.一種魔芋細胞核提取液，其特征在于：每1.5mL魔芋細胞核提取液的配制如下：取5.55mgKCL，3.69mgMgSO4，1.8mgHepes，36.3μL10%TritonX-100，0.5gPVP，用蒸餾水溶解至1.5mL。
2.權利要求1所述的魔芋細胞核提取液在魔芋基因組含量測定中的應用。
3.一種魔芋基因組含量值的快速測定方法，其特征在于包括如下步驟：
（1）取魔芋幼嫩葉片，玉米白化幼嫩葉片為內參；
（2）將魔芋、玉米的幼嫩葉片混合剪碎后加到權利要求1所述的魔芋細胞核提取液中，用刀片垂直切碎后過濾除去懸浮物；
（3）過濾后的細胞懸液離心后棄上清液；
（4）離心后的沉淀用MgSO4緩沖液重懸；每445μLMgSO4緩沖液的配制為：取5.55mgKCL，3.69mgMgSO4，1.8mgHepes，用蒸餾水溶解至445μL；
（5）往細胞重懸液中加入RNAse和PI染料，混勻后避光染色；
（6）染色后的細胞懸液于流式細胞儀下測定。
4.根據權利要求3所述的魔芋基因組含量值的快速測定方法，其特征在于包括如下步驟：
（1）取魔芋幼嫩葉片0.5g，玉米白化幼嫩葉片0.2g作為內參；
（2）將魔芋、玉米的幼嫩葉片混合剪碎后加到1.5mL細胞核提取液中，用刀片垂直切碎后再用400目的尼龍網過濾除去懸浮物；
（3）過濾后的細胞懸液于3000rpm下離心1.5分鐘，棄上清液；
（4）離心后的沉淀于445μLMgSO4緩沖液重懸；
（5）往細胞重懸液中加入50μL50μg/mL的RNAse和5μL50μg/mL的PI染料，混合均勻，避光下染色15分鐘；
（6）染色后的細胞懸液于流式細胞儀下測定；采用488nm的藍光激發，收集通道的熒光，檢測PI的發射熒光強度；每個待測樣本至少收集1萬個細胞，每個樣本重復測定3次以上；魔芋基因組含量值由下列公式得出：魔芋基因組含量值=內參基因組含量值*魔芋流式熒光強度/內參流式熒光強度。
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