[發明專利]地中海貽貝的雌核發育誘導方法

在審

• 申請號: 201510959564.2
• 申請日: 2015-12-21
• 公開（公告）號: CN106906204A
• 公開（公告）日: 2017-06-30
• 發明（設計）人: 褚方強
• 申請（專利權）人: 青島清泉生物科技有限公司
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N5/075;A01K61/54
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種地中海貽貝的雌核發育誘導方法，其特征在于，采用電刺激法，電刺激前先將卵子移入電刺激緩沖液中平衡 2min,調好電脈沖儀參數，用吸管吸取 1ml 卵子放入電擊杯中，即可進行電刺激處理；

所述電刺激緩沖液為山梨醇緩沖液，具體成分為：含有0.25 mmol/L Mg(C₂H₃O₂)₂·4H₂O，0.5 mol/L Hepes，0.1 mmol/L Ca(C₂H₃O₂)₂H₂O，1% BSA，0.25 mmol/L山梨醇；

所述電脈沖儀參數為場強1.25 kv/cm，電容4μF，2次電脈沖。

2.根據權利要求1所述的地中海貽貝的雌核發育誘導方法，其特征在于，所述電刺激時的卵子密度為6×10⁴個/ml。

3.根據權利要求1所述的地中海貽貝的雌核發育誘導方法，其特征在于，電刺激后卵子及胚胎的培養方法為：經電刺激后的卵子被放入直徑 15 cm 培養皿中，用高溫蒸煮的過濾海水培養，水溫保持 20℃，培養密度為每個培養皿中每升約 2×10⁵個卵子；培養初期每半小時輕輕攪動海水一次，以后每 3~4h 攪動一次，以促進其孵化。

4.根據權利要求1所述的地中海貽貝的雌核發育誘導方法，其特征在于，電刺激處理后 2 小時統計各組的卵裂率，24 小時統計胚胎存活率；

卵裂率或雌核發育誘導率=發生卵裂和排放極體的卵數/觀察總卵數×100%；

胚胎存活率=上浮的原腸胚數量/發生卵裂的總卵數×100%。