[發明專利]一種薄荷多倍性的鑒定方法

在審

• 申請號: 201510948998.2
• 申請日: 2015-12-18
• 公開（公告）號: CN105602886A
• 公開（公告）日: 2016-05-25
• 發明（設計）人: 于盱;梁呈元;亓希武;房海靈;李維林
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種薄荷多倍性鑒定的方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）分生組織準備：

選取當年生植株葉片作為外植體，沖洗干凈后，進行消毒；切取0.5×0.5cm大小，將其接種于愈傷組織誘導培養基中進行愈傷組織的誘導，培養溫度為18-24℃，首先在黑暗中培養24h，然后進行正常培養15-20d；所述正常培養條件為：溫度18-24℃，光照強度為1600-2000lx光照時間為8-10h/d，；所述誘導培養基為MS培養基并添加激素2,4-D和KT；所述誘導培養基中2,4-D濃度為1.0-6.0mg/L，KT濃度為0.5-1.0mg/L；將得到的薄荷葉片切口邊緣愈傷組織切割后接入繼代增殖培養基中進行繼代培養25-35d，培養溫度為20-26℃，光照時間為10-16h/d，光照強度為1600-2000lx；所述繼代增殖培養基為MS培養基并添加激素2,4-D和KT；所述繼代增殖培養基中2,4-D濃度為2.0-4.0mg/L，KT濃度為1.0-2.0mg/L；

（2）分生組織的處理：取步驟（1）中增殖旺盛的愈傷組織，切割后浸泡于含有0.1-0.2%秋水仙素溶液中2-6h后取出，蒸餾水清洗表面溶液后用乙醇-冰醋酸濃度比（3:1）固定液固定24h后取出蒸餾水清洗表面溶液；充分清洗至無味后用2.5%混合酶液酶解室溫下2-4h；蒸餾水洗去酶液后于新鮮蒸餾水中浸泡30min；

（3）分生組織細胞壓片：取步驟（2）中處理后的愈傷組織于載玻片上用鑷子將其壓碎，去除大塊殘碎材料，加入改良的苯酚品紅溶液染色后將載玻片在酒精燈上加熱，染色完成后用45%醋酸溶液分色，加上蓋玻片后用鑷子輕敲蓋片使細胞分散均勻；

上述誘導培養基、繼代增殖培養基中均含有瓊脂6.0-7.0g/L、蔗糖25-35g/L，且pH值為5.6-5.8。

2.根據權利要求1所述薄荷多倍性鑒定的方法，其特征在于：所述步驟（2）中所取葉片正面朝上放在培養基上。

3.根據權利要求1所述薄荷多倍性鑒定的方法，其特征在于：增殖旺盛的愈傷組織為繼代培養基上生長8-15d的新生增殖細胞團。

4.根據權利要求1所述薄荷多倍性鑒定的方法，其特征在于：所述步驟（2）中所取新生增殖旺盛的愈傷組織為嫩黃色或白色松散愈傷組織。

5.根據權利要求1所述薄荷多倍性鑒定的方法，其特征在于：所述步驟（2）中浸泡于含有0.1%-0.2%秋水仙素溶液中2-6h小時浸泡溫度為0-4℃。

6.根據權利要求1所述薄荷薄荷多倍性鑒定的方法，其特征在于：所述步驟（3）中用改良的苯酚品紅染色時間為10-15min。