[發(fā)明專利]一種快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510926237.7
• 申請(qǐng)日: 2015-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN105424666B
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓利文;張?jiān)?/a>;何秋霞;韓建;孫晨;侯海榮;王榮春;彭維兵;王雪;陳錫強(qiáng);楚杰;劉可春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省科學(xué)院生物研究所
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64;G01B11/28
• 代理公司: 濟(jì)南金迪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 張宏松

1.一種快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，包括步驟如下：

(1)將受精后21h～24h的發(fā)育正常斑馬魚胚胎移入培養(yǎng)孔中，對(duì)培養(yǎng)孔中的斑馬魚胚胎連續(xù)給藥孵育，記為待測(cè)化合物組；同時(shí)在相同條件下以不給藥孵育設(shè)置對(duì)照，記為對(duì)照組；

(2)麻醉孵育后對(duì)照組、待測(cè)化合物組的每條斑馬魚，采集每條斑馬魚的熒光顯微圖像，記錄斑馬魚尾部血管熒光情況，測(cè)量每組斑馬魚的尾靜脈(tPCV)網(wǎng)面積以及尾靜脈網(wǎng)對(duì)應(yīng)的節(jié)間血管(ISV)區(qū)域面積，按照如下公式計(jì)算tPCV網(wǎng)相對(duì)面積：

tPCV網(wǎng)相對(duì)面積＝tPCV網(wǎng)面積/對(duì)應(yīng)的節(jié)間血管(ISV)區(qū)域面積；

(3)定量分析

計(jì)算得到的每組斑馬魚tPCV網(wǎng)相對(duì)面積以表示，分析比較對(duì)照組、待測(cè)化合物組之間差異的顯著性；

當(dāng)待測(cè)化合物組斑馬魚的大于對(duì)照組斑馬魚的且達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性水平P<0.05，待測(cè)化合物組斑馬魚的節(jié)間血管(ISV)無缺失，說明待測(cè)藥物對(duì)斑馬魚的血管生成具有促進(jìn)作用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，步驟(1)中，斑馬魚胚胎為24hpf的斑馬魚胚胎。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，所述斑馬魚胚胎為血管熒光標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的給藥方式為將斑馬魚胚胎不間斷浸泡在藥液中，直至觀察結(jié)果。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，待測(cè)化合物組、對(duì)照組每組斑馬魚胚胎總數(shù)不少于8枚，孵育溫度為26～30℃，避光孵育，孵育時(shí)間為1天。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，步驟(2)中斑馬魚的麻醉為采用質(zhì)量濃度為0.3‰的三卡因浸泡40～90s進(jìn)行麻醉。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，步驟(2)中采集圖像為將斑馬魚胚胎固定側(cè)面體位固定，在熒光顯微鏡下觀察、拍照，獲得斑馬魚胚胎的側(cè)位圖像。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，步驟(2)中，采集的圖像是在同一的放大倍數(shù)下獲得的，圖像格式為jpg格式。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，步驟(2)中測(cè)量面積為利用圖像處理軟件Image J對(duì)采集的圖像進(jìn)行測(cè)量，測(cè)量前先校準(zhǔn)標(biāo)尺，得到準(zhǔn)確的面積。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速、定量評(píng)價(jià)化合物對(duì)斑馬魚血管生成促進(jìn)作用的方法，其特征在于，步驟(3)中的定量分析，是在待測(cè)化合物組斑馬魚的節(jié)間血管(ISV)無缺失條件下進(jìn)行。