[發(fā)明專利]一種檢測(cè)Dubin-Johnson綜合癥的ABCC2基因的試劑盒及其檢測(cè)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510925072.1
• 申請(qǐng)日: 2015-12-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105463086A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 程樂(lè)華;鄧小凈;盧守建;樂(lè)亞玲;梁超;王緒華;方國(guó)偉;陳忠;黃士昂
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海新培晶醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233
• 代理人: 黃志達(dá)

1.一種檢測(cè)Dubin-Johnson綜合癥的ABCC2基因的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括PCR擴(kuò)增反應(yīng)試劑以及用于樣本DNA中ABCC2基因擴(kuò)增的PCR引物；其中，PCR引物如下：

ABCC2-3F：CCTATCCATCACCGGAAACC；

ABCC2-3R：TGTTTCACCCCATTCCAACC；

ABCC2-7F：TATCGACAAGATCGCAACTCC；

ABCC2-7R：ATCTTCCGCTGGCAATCA；

ABCC2-8F：TGGAACAGTGAAGGCAGC；

ABCC2-8R：CATCTTGAAAACTGCCTGC；

ABCC2-9F：GCTAGATGCGATGGCGTATG；

ABCC2-9R：CCTCAACCTTGGAATCAATGCT；

ABCC2-13F：AGGTGGTGTAGGTCTATAGTGGA；

ABCC2-13R：AGTTTACCAGCAAAAGTTAGACAT；

ABCC2-15F：AGATTTCATTCACCTCCTGTTAG；

ABCC2-15R：GATATTCATGGCCCCATAGTAG；

ABCC2-16F：CAGACTTCATGGAGACTCAGAGA；

ABCC2-16R：GGAGAAGGCACTGAGGGCTA；

ABCC2-17F：AGCATCACACACATTTATCATCTAA；

ABCC2-17R：CCACTTAGTACAAACACATGATTTC；

ABCC2-18F：ACCTCTGCTCTACATTGTCACA；

ABCC2-18R：GTGTAACCAAGAGTCGAGTCTATAA；

ABCC2-23F：TTAGCCCAAGGTATGTCTGATG；

ABCC2-23R：GTCTTCTTCACTAGATGCTGAGCTA；

ABCC2-25F：CGGAGCCTCTCATCATTCTG；

ABCC2-25R：CCTCCCACCGCTAATATCAA；

ABCC2-28F：AAGTCTAGTTCAGCCTATTAAATGC；

ABCC2-28R：CTGCTCTCCACTCTGTCCAAT；

ABCC2-29F：CTTACCTCCTGTGACTGTGAATG；

ABCC2-29R：CCGAGTAGACCGTGGAATTGA；

ABCC2-30F：GAACTCCGAGGTCCTTTTCTG；

ABCC2-30R：AGGAATCAGACCTGGATGAAAAT。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)Dubin-Johnson綜合癥的ABCC2基因的試劑盒，其特征在于：所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)試劑包括DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂和反應(yīng)緩沖液。

3.一種如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)Dubin-Johnson綜合癥的ABCC2基因的試劑盒的檢測(cè)方法，包括如下步驟：

(1)采集待測(cè)血液樣本，提取DNA；

(2)以該DNA為模板，采用用于樣本DNA中ABCC2基因擴(kuò)增的PCR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR反應(yīng)產(chǎn)物，進(jìn)行測(cè)序分析，確定是否存在堿基突變。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種檢測(cè)Dubin-Johnson綜合癥的ABCC2基因的試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟(2)中的PCR反應(yīng)條件為：95℃5min；95℃30s、62℃30s、72℃40s，15個(gè)循環(huán)；95℃30s，55℃30s，72℃40s，25個(gè)循環(huán)；最后72℃10min。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種檢測(cè)Dubin-Johnson綜合癥的ABCC2基因的試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于：所述步驟(2)中的PCR反應(yīng)體系為：PCR擴(kuò)增反應(yīng)試劑10μL，ddH₂O6μL，上下游引物各1μL，樣品DNA2μL。