[發(fā)明專利]一種用于蛋白標(biāo)記及檢測(cè)的熒光探針及其合成方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510923072.8
• 申請(qǐng)日: 2015-12-11
• 公開（公告）號(hào): CN106867515B
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐兆超;喬慶龍;苗露
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號(hào): C07D221/14
• 分類號(hào): C07D221/14;C09K11/06;C07D473/18;G01N21/64;C07K1/13
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種用于蛋白標(biāo)記及檢測(cè)的熒光探針，其特征在于：所述熒光探針的結(jié)構(gòu)如下：

2.一種如權(quán)利要求1所述的用于蛋白標(biāo)記及檢測(cè)的熒光探針的合成方法，其特征在于包含步驟如下：

(1)中間體4-疊氮基-1,8-萘酐的合成：

將4-溴-1,8-萘酐溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)制成反應(yīng)液，疊氮化鈉溶于水中，滴加至反應(yīng)液，加熱至90-100℃，持續(xù)4-8h，冷卻，倒入200-300mL冰水中抽濾，得4-疊氮基-1,8-萘酐；

(2)中間體4-氨基-1,8-萘酐的合成：

將4-疊氮基-1,8-萘酐置于乙腈中，并加入九水硫化鈉，加熱至50-70℃，持續(xù)8-20h，冷卻，倒入200-300mL冰水中，抽濾得4-氨基-1,8-萘酐；

(3)中間體4-(2-氯乙酰基)氨基-1,8-萘酐的合成：

將4-氨基-1,8-萘酐置于四氫呋喃中，并在冰浴下加入氯乙酰氯，室溫?cái)嚢?0-16h，減壓除去溶劑，硅膠柱分離，以二氯甲烷為洗脫劑，減壓除去溶劑得4-(2-氯乙酰基)氨基-1,8-萘酐；

(4)中間體4-(2-(N,N-二乙基氨基)乙酰基)氨基-1,8-萘酐的合成：

將4-(2-氯乙酰基)氨基-1,8-萘酐置于乙腈中，攪拌下加入二乙胺，加熱至50-70℃，2-4h，減壓除去溶劑，硅膠柱分離，以二氯甲烷：甲醇＝100:1-20:1為洗脫劑，減壓除去溶劑得4-(2-(N,N-二乙基氨基)乙酰基)氨基-1,8-萘酐；

(5)將4-(2-(N,N-二乙基氨基)乙酰基)氨基-1,8-萘酐溶于乙醇中，攪拌下加入2-氨基-6-(4-氨甲基)芐氧基-嘌呤，加熱至80-90℃，3-6h，減壓除去溶劑，硅膠柱分離，以二氯甲烷：甲醇＝50:1-10:1為洗脫劑，減壓除去溶劑得探針。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(1)中，4-溴-1,8-萘酐、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、疊氮化鈉,其質(zhì)量比例為2:10:1-2:30:1。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(2)中，4-疊氮基-1,8-萘酐、乙腈、九水硫化鈉，其質(zhì)量比為1:50:3-1:100:8。

5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(3)中，4-氨基-1,8-萘酐、四氫呋喃、氯乙酰氯，其質(zhì)量比為5:80:1-5:160:2，所述硅膠柱分離,以二氯甲烷為洗脫劑，減壓除去溶劑得4-(2-氯乙酰基)氨基-1,8-萘酐。

6.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(4)中，4-(2-氯乙酰基)氨基-1,8-萘酐、乙腈、二乙胺，其質(zhì)量比為2:80:1-2:160:1.5，所述硅膠柱分離，以二氯甲烷：甲醇＝100:1-20:1為洗脫劑，減壓除去溶劑得4-(2-(N,N-二乙基氨基)乙酰基)氨基-1,8-萘酐。

7.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：步驟(5)中，4-(2-(N,N-二乙基氨基)乙酰基)氨基-1,8-萘酐、乙醇、2-氨基-6-(4-氨甲基)芐氧基-嘌呤,其質(zhì)量比為1:200:1.5-1:800:3；所述硅膠柱分離，以二氯甲烷：甲醇＝50:1-10:1為洗脫劑，減壓除去溶劑得探針。

8.一種如權(quán)利要求 1 所述的用于蛋白標(biāo)記及檢測(cè)的熒光探針在SNAP蛋白標(biāo)記與檢測(cè)及在生物熒光成像中的應(yīng)用,所述應(yīng)用不包含在疾病診斷和疾病治療中的應(yīng)用。