[發明專利]一種能拆分（＋/-）γ-內酰胺得到（+）γ-內酰胺的芽孢桿菌及其篩選和應用

有效

• 申請號: 201510918447.1
• 申請日: 2015-12-11
• 公開（公告）號: CN105567584B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發明（設計）人: 王金昌;靳亮;王建軍
• 申請（專利權）人: 江西省科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P41/00;C12R1/07
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 張艷美;胡全利

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種能拆分（＋/?）γ?內酰胺得到（+）γ?內酰胺的芽孢桿菌及用其拆分（＋/?）γ?內酰胺的方法；本發明方法利用從土壤中篩選獲得的能拆分（＋/?）γ?內酰胺得到（+）γ?內酰胺的微生物菌株，鑒定為阿氏芽胞桿菌(Bacillus aryabhattai)C4；其在水相體系中立體選擇性水解（＋/?）γ?內酰胺，制備（+）γ?內酰胺。在300g/L底物濃度條件下，經萃取、干燥、蒸發濃縮、冷卻結晶得到產物（+）γ?內酰胺的光學純度(Ee值)為95.0％～99.9％，化學純度為95％～99％。該微生物催化不對稱水解（＋/?）γ?內酰胺制備（+）γ?內酰胺的方法具有高立體選擇性、高反應產率和高產物濃度的特點。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種能拆分(+/-)γ-內酰胺得到(+)γ-內酰胺的芽孢桿菌，該芽孢桿菌為阿氏芽胞桿菌(Bacillus aryabhattai)C4。

背景技術

γ-內酰胺的兩個光學對映體都是許多碳環核苷類似物合成的手性前體。趨化因子受體抗結劑MK-0812和糖尿病候選藥物美格列汀，可由(+)γ-內酰胺合成。產物(+)γ-內酰胺經溴化進行骨架重排生成(-)γ-內酰胺，以光學純的(-)γ-內酰胺為起始化合物的酶化學合成方法，是合成阿巴卡韋和帕拉米韋這兩種治療艾滋病和禽流感及甲流感的特效藥物的最簡便、經濟的方法。

在發現微生物能選擇性拆分(+/-)γ-內酰胺得到(+)γ-內酰胺之前，文獻報道的制備光學純的(+)γ-內酰胺一般采用化學不對稱合成的方法。使用這種方法的缺點在于：原料昂貴，步驟煩瑣，成本較高，且會造成較嚴重的環境污染，同時產物中通常含有金屬雜質。與此形成鮮明對比的是，用微生物進行催化合成光學純的(+)γ-內酰胺具有反應條件溫和效率高，產物純度高及對環境友好的特點。有關該方法的研究主要集中在篩選高對映選擇性的拆分(+/-)γ-內酰胺得到 (+)γ-內酰胺的生產菌株，暫無相關報道。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的目的之一在于提供一種能拆分(+/-)γ-內酰胺得到(+)γ-內酰胺的芽孢桿菌。

該芽孢桿菌為阿氏芽胞桿菌(Bacillus aryabhattai)C4，于2015年10月 10日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC NO:M 2015597，保藏單位地址：中國武漢武漢大學。

本發明的目的之二是提供了所述能拆分(+/-)γ-內酰胺得到(+)γ-內酰胺的芽孢桿菌的培養方法。

本發明的目的之三是提供了所述芽孢桿菌拆分(+/-)γ-內酰胺得到(+)γ-內酰胺的方法。

本發明是通過以下技術方案來實現的：

一種能拆分(+/-)γ-內酰胺得到(+)γ-內酰胺的芽孢桿菌；其在中國典型培養物保藏中心的保藏編號為：CCTCC NO:M 2015597。

所述芽孢桿菌的篩選，具體為：

(1)初培養：從湖底取污泥，用無菌水稀釋后涂布于培養基上，30℃培養2天；