[發(fā)明專利]一種能拆分（＋/-）γ-內酰胺得到（+）γ-內酰胺的芽孢桿菌及其篩選和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510918447.1
• 申請日: 2015-12-11
• 公開（公告）號: CN105567584B
• 公開（公告）日: 2019-03-08
• 發(fā)明（設計）人: 王金昌;靳亮;王建軍
• 申請（專利權）人: 江西省科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P41/00;C12R1/07
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 張艷美;胡全利

1.一種能拆分(+/-)γ－內酰胺得到(+)γ－內酰胺的芽孢桿菌，其特征在于，所述芽孢桿菌為阿氏芽胞桿菌(Bacillus aryabhattai)C4，于2015年10月10日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為：CCTCC NO：M2015597。

2.一種權利要求1所述芽孢桿菌的應用，其特征在于，采用所述芽孢桿菌，在水相體系中，以(+/-)γ－內酰胺為底物，進行不對稱水解拆分制備得到所述(+)γ－內酰胺。

3.如權利要求2中所述芽孢桿菌的應用，其特征在于，所述以(+/-)γ－內酰胺為底物，進行不對稱水解拆分制備得到所述(+)γ－內酰胺的具體步驟如下：

(1)微生物菌株：權利要求1所述的芽孢桿菌；

(2)先將步驟(1)中所述的芽孢桿菌進行離心獲得濕菌體備用；

(3)拆分體系的配制：用磷酸鹽緩沖液配制2g/L～600g/L的(+/-)γ－內酰胺；

(4)拆分(+/-)γ－內酰胺得到(+)γ－內酰胺：將步驟(3)的配制好的(+/-)γ－內酰胺加入到在步驟(2)的濕菌體中進行反應；

(5)拆分液的處理和分析：將步驟(4)中所得微生物拆分反應之后的液體，離心除去菌體，取上清液采用乙酸乙酯萃取，萃取液稀釋后進行手性HPLC檢測；

(6)產(chǎn)物的分離提取：采用二氯甲烷萃取步驟(5)中所得菌體，并依次經(jīng)過干燥、蒸發(fā)濃縮、冷卻結晶，最后得到所述的(+)γ－內酰胺。

4.如權利要求3中所述芽孢桿菌的應用，其特征在于，所述步驟(3)中磷酸鹽緩沖液的pH3～10，濃度為0.01～0.5mol/L。

5.如權利要求3中所述芽孢桿菌的應用，其特征在于，所述步驟(4)中菌體終濃度為0.5g/L～100g/L濕菌體，反應溫度為20～60℃，反應時間為1～24h，

搖床轉速為100～300rpm。

6.如權利要求3中所述芽孢桿菌的應用，其特征在于，所述步驟(6)中在20～80℃下蒸發(fā)濃縮、1～4℃下冷卻結晶。

7.如權利要求3中所述芽孢桿菌的應用，其特征在于，所述步驟(6)中所述(+)γ－內酰胺的光學純度為95.0％～100％，化學純度為95％～99％。