[發明專利]一種產酸屎腸球菌、抑菌微生態制劑及其應用

在審

• 申請號: 201510917814.6
• 申請日: 2015-12-10
• 公開（公告）號: CN105368755A
• 公開（公告）日: 2016-03-02
• 發明（設計）人: 李富偉;吳培均;駱驊;李兆勇;韓明渠;楊忠廣
• 申請（專利權）人: 北京科為博生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/00;A23K10/18;A23K20/195;C12R1/125;C12R1/01
• 代理公司: 北京方安思達知識產權代理有限公司 11472
• 代理人: 王宇楊;陳琳琳

技術領域

本發明涉及微生物領域，具體地，本發明涉及一種產酸屎腸球菌、抑菌微生態制劑及其應用。

背景技術

隨著我國農業養殖結構調整，規模化、集團化養殖已成為發展趨勢，養殖戶為了追求經濟效益最大化，在飼料中添加飼用抗生素、激素及益生菌制劑等，以達到促進動物增重和快速生長的目的。但是添加促生長飼用抗生素等藥物會使致病菌的耐藥性越來越普遍、耐藥譜越來越廣，由此引起動物疫病越來越難以控制，形成惡性循環，不但影響畜牧養殖業的可持續發展，還會造成畜禽類產品中殘留抗生素和激素的嚴重超標，直接影響到人類的身體健康。

細菌素是由某些細菌通過基因編碼、核糖體合成的具有抑菌生物活性的蛋白或肽類。細菌素與抗生素在生物合成、作用機制、抑菌譜等方面明顯不同，細菌素可以安全、有效地使用已達到控制目標病原微生物生長的目的。乳酸菌為人類和動物腸道主要菌群，在動物腸道內可以分泌出乳酸，降低動物腸道的pH值，常用于人和動物益生菌產品。

枯草芽孢桿菌不是腸道的常住菌，只屬于過路菌，不會在腸道內長期定植與生長，它會隨著食物進入胃腸道，最終又與糞便一起排出體外。若直接添加由枯草芽孢桿菌，由于其在動物腸道內停留時間短，其代謝產物--細菌素還未合成或合成量較少，無法充分發揮抑菌作用。

本發明將枯草芽孢桿菌在體外進行大規模發酵生產細菌素，并將其與乳酸菌進行協同組合，制備出高效抑菌的微生態制劑。該微生態制劑進入動物胃腸道后可快速發揮抑菌作用，有效調節胃腸道的微生態平衡，維護動物健康。

發明內容

本發明的目的在于提供一種產酸屎腸球菌及其抑菌微生態制劑，其具有高效抑菌的能力。

本發明的另一目的提供上述產酸屎腸球菌及其抑菌微生態制劑的應用。

本發明提供的產酸屎腸球菌CE001(Enterococcusfaecium)，其菌種保藏編號為：CGMCCNO.9666。本發明的屎腸球菌，具有良好的產酸性能。

本發明的抑菌微生態制劑，包括枯草芽孢桿菌所產細菌素和本發明上述的產酸屎腸球菌；所述細菌素與屎腸球菌的比例為1g細菌素比2～5億屎腸球菌活菌數。

本發明所使用的枯草芽孢桿菌可以是現有的細菌素的任意菌株，尤其優選的，本發明所述枯草芽孢桿菌選用購自中國農業微生物菌種保藏管理中心，其保藏號為ACCC10619的菌株。

本發明的上述抑菌微生態制劑的制備方法，包括以下步驟：

1)將制備的枯草芽孢桿菌所產細菌素按比例加入到發酵后期的屎腸球菌發酵液中，攪拌混合均勻；

2)將混合后的發酵液固液分離獲得菌泥，在菌泥中加入干燥保護劑，所述菌泥與干燥保護劑的質量體積比(g/L)為5％～25％，采用制粒、凍干或噴霧干燥制成抑菌微生態制劑。

進一步地，根據本發明的制備方法，所述細菌素的制備包括以下步驟：

1)將枯草芽孢桿菌菌株接種到發酵用培養液中，在37～39℃條件下，培養48～50h，得到發酵液；

2)將發酵液經5000～12000r/m離心5-30min中取上清液，在上清液中緩慢加入硫酸銨固體粉末進行鹽析，邊加邊攪拌，直到飽和度達20～80％，然后在4～5℃條件下靜置4～2h，再在2～10℃條件下、以5000～12000r/m轉速離心10～30min，棄去上清液得到細菌素。

本發明所述的枯草芽孢桿菌菌株發酵用培養液可以使用本領域公知的任意用于枯草芽孢桿菌的培養液，優選地，所用培養液包含(重量比)：玉米粉0.5％～3.5％、豆餅粉1.0％～5.0％、魚粉0.01％～0.5％、葡萄糖0.2％～2.0％、碳酸鈣0.5％～5.0％、硫酸銨0.001％～0.2％、磷酸氫二鉀0.001％～0.2％、硫酸鎂0.001％～0.2％、硫酸錳0.001％～0.2％，純凈水1升，pH為7.0～7.5。

所述的細菌素的活力單位可達17361.68U/mg，可抑制多種革蘭氏陰性和革蘭氏陽性病原菌。

根據本發明的制備方法，所述屎腸球菌發酵液的制備方法包括以下步驟：

1)在種子培養基中，35～45℃有氧或兼性條件下培養屎腸球菌18～24小時，成為一級種子；

2)將一級種子液接種在種子罐中進行擴大培養，在35～45℃有氧或兼性條件下培養18～24小時，成為二級種子；

3)將獲得的二級種子液接種在發酵罐中進行發酵培養，在30～45℃有氧或兼性條件下，采用定時或連續補料分批發酵方式培養18～36小時；