[發明專利]水產品常見病毒檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201510916133.8
• 申請日: 2015-12-11
• 公開（公告）號: CN105349705B
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 劉凡;云振宇;孫昭;張瑤;劉貞;彭麗萍;胡太貴;鄧遠洪;黃廣平
• 申請（專利權）人: 四川華漢三創生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 楊志廷

1.一種水產品常見病毒檢測試劑盒，包括引物組合、膜芯片和輔料，其特征在于引物組合為7重聚合酶鏈式反應引物組合，各對引物的堿基序列5’-3’如下：

外參基因:正向引物:GATTTGGACCTGCGAGC

反向引物:GGTTGGCCAGGCGCGAAG；

甲肝病毒:正向引物:ACAACTGTAAATGGAACCCC

反向引物:AGCAACATGGATGCCCAA；

星狀病毒:正向引物:GAATTTCCTCTCCGCCTGAC

反向引物:CGGTTGTTCTCATCAGAGTCC；

諾瓦克病毒:正向引物:ACCTAACCACCAGAACCCCTT

反向引物:CTCAGCATCCATTGTTCCAAAGCG；

輪狀病毒:正向引物:CTTTTCCATCCGAAATTAACAC

反向引物:AATATAAGGCAACCACGGTA；

脊灰病毒:正向引物:AGGAGAAAATTATCCCACAAGC

反向引物:AAACATACTGGTTCAATACGGTG；

柯薩奇病毒:正向引物:AAAACGTGGCAGCTAATGGA

反向引物:GCCACTCACCATAAGCAACA；

其中，反向引物的5’端接上Tag序列，該Tag序列為

5’-AGTCCATGTCCCGAAACGTATACCGCAGTATGGCT-3’；

引物組合中還含有一條5’端帶生物素標志的Tag引物，其堿基順序如下所示：

Tag引物：biotin-5’-AGTCCATGTCCCGAAACGTATACCGCAGTATGGCT-3’；

膜芯片為順序固定在支持膜表面的7組探針序列、1組陽性對照探針序列和1組陰性對照探針序列，7組探針序列、陽性對照探針序列和陰性對照探針序列的堿基序列5’-3’如下：

外參基因探針:CTGACCTGAAGGCTCT；

甲肝病毒探針:TCCAGGAAGACCTTCGCCTT；

星狀病毒探針:CTGTCCGCTTCATCGTCTTCGT；

諾瓦克病毒探針:CCCAACTAATGGCCCTGCTCGGT；

輪狀病毒探針:CAAATTTACTTCCACCGTACACA；

脊灰病毒探針:TTCCTGACTAGGGCATGATTGGT；

柯薩奇病毒探針:ACGGTCACTGTAACCACATGCTTC；

Positive探針:GCATCCAGATCAGAAGCAATAATGAGCAGTGCGAGAAGAACGAGTGTCCAAAGTACCAG；

Negative探針:GGTTCCTTGAGAAATGTTTTACGGGATTACTTCCATGTTTGTTGGATGATCCTATTTTC；

輔料為dNTPs、EX-Taq聚合酶及5’端帶生物素標志的陽性寡核苷酸單鏈DNA，該單鏈的堿基序列為：

biotin-5'-CTGGTACTTTGGACACTCGTTCTTCTCGCACTGCTCATTATTGCTTCTGATCTGGATGC-3’。

2.根據權利要求1所述的水產品常見病毒檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒由引物組合、膜芯片、輔料和配液組成，配液為10×PCR緩沖液、預雜交液、雜交液、洗液、封閉液、鏈酶親和素標記辣根過氧化物酶和四甲基聯苯胺顯色液。