[發(fā)明專利]一種高效表達羅氏沼蝦甲殼素的釀酒酵母工程菌

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510908140.3
• 申請日: 2015-12-10
• 公開（公告）號: CN105296374A
• 公開（公告）日: 2016-02-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 杜婕;蔣伶活
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12P21/02;A23K20/195;A23K50/80;C12R1/865
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 耿曉岳

1.一種高效表達羅氏沼蝦甲殼素的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述工程菌的構(gòu)建方法是將羅氏沼蝦甲殼素MrCrustin的cDNA克隆至表達質(zhì)粒pHAC181上得到測序驗證正確的重組質(zhì)粒pHAC181-MrCrustin，然后設(shè)計同源重組引物，利用同源重組技術(shù)將目的基因MrCrustin整合至釀酒酵母宿主菌株的GAL1啟動子下游。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述MrCrustin的cDNA的CDS區(qū)域翻譯后的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述MrCrustin的cDNA的CDS區(qū)域的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述pHAC181是在YCplac181的SphI和EcoRV位點插入3個組氨酸標簽得到的。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述釀酒酵母工程菌是按照如下方法構(gòu)建得到的：(1)以羅氏沼蝦的cDNA為模板PCR擴增或者直接化學合成，得到核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的MrCrustin基因片段；(2)將MrCrustin基因片段克隆到表達質(zhì)粒pHAC181上，得到重組表達質(zhì)粒pHAC181-MrCrustin；(3)設(shè)計同源重組引物，對質(zhì)粒pHAC181-MrCrustin進行擴增，得到含有MrCrustin基因的核苷酸片段，使用同源重組的方法，將該核苷酸片段整合至釀酒酵母菌株中GAL1啟動子下游。

6.一種高效表達羅氏沼蝦甲殼素MrCrustin的方法，其特征在于，所述方法是使用權(quán)利要1-5任一所述釀酒酵母工程菌為生產(chǎn)菌株。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法是將釀酒酵母工程菌活化后，接種于YPG培養(yǎng)基中，在半乳糖的誘導下培養(yǎng)6h；所述YPG培養(yǎng)基含有D-半乳糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母提取物10g/L。

8.權(quán)利要求1-5任一所述釀酒酵母工程菌生產(chǎn)得到的羅氏沼蝦甲殼素MrCrustin。

9.權(quán)利要求1-5任一所述釀酒酵母工程菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖、水產(chǎn)動物免疫或添加劑方面的應(yīng)用。