[發明專利]一種大鼠肝S9的誘導及制備方法

在審

• 申請號: 201510907047.0
• 申請日: 2015-12-07
• 公開（公告）號: CN106834206A
• 公開（公告）日: 2017-06-13
• 發明（設計）人: 田瑞;張亞洲;蔣敏;齊來俊
• 申請（專利權）人: 江蘇齊氏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C07K14/47;C12N9/02
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1.一種大鼠肝S9的誘導及制備方法，其特征在于：(a)挑選大鼠，按照大鼠的體重，用不同的方式和劑量腹腔注射兩種誘導劑以確定最佳誘導方法；(b)處死大鼠，在無菌條件下，除去肝中殘血，取出肝臟；(c)在無菌條件下，按一定的肝濕重比加入預冷的儲存緩沖液中，充分剪碎，在冰浴中勻漿；(d)將勻漿好的組織液低速離心，收集上清和沉淀，并將上清高速離心收集上清，即首次獲得大鼠肝S9；(e)將收集的沉淀，按一定的比重加入預冷的儲存緩沖液，在無菌和冰浴條件下充分研磨并在不同條件下超聲破碎細胞，將其在高速離心收集上清，即再次獲得大鼠肝S9；(f)BCA法和CO還原法檢測不同條件下大鼠肝S9蛋白以及酶含量。

2.根據權利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導及制備方法，其特征在于，所述的大鼠為SD雄性大鼠，體重為230±20g。

3.根據權利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導及制備方法，其特征在于，所述的兩種誘導劑為苯巴比妥鈉(溶于PBS)和β-奈黃酮(溶于玉米油)，所述的最佳誘導方法為第1d大鼠腹腔注射劑量為30mg/kg的苯巴比妥鈉和劑量為40mg/kg的β-萘黃酮，第2d注射劑量為80mg/kg的β-萘黃酮，第3d注射劑量為60mg/kg的苯巴比妥鈉，第4d注射劑量為80mg/kg的β-萘黃酮，第5d注射苯巴比妥鈉60mg/kg。

4.根據權利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導及制備方法，其特征在于，所述的步驟b中除去肝中殘血是將事先冰浴的肝素液經肝門靜脈灌洗除去殘血，所述的肝素液為10mM PBS(0.15M KCl，pH 7.4)，20％肝素(2500U/mL)。

5.根據權利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導及制備方法，其特征在于，所述的步驟c中按一定的肝濕重比加入預冷的儲存緩沖液，其比例為 1∶2-4，所述的儲存緩沖液為0.15M KCl(pH7.4)。

6.根據權利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導及制備方法，其特征在于，所述的步驟d中勻漿好的組織液低速離心，其離心速度為1500rpm/min，時間5min。

7.根據權利要求1所述的一種大鼠肝S9的誘導及制備方法，其特征在于，所述的步驟e中按一定比重加入預冷的儲存緩沖液，其比例為1∶2，所述的在不同冰浴超聲條件下破碎細胞，其超聲條件分別為34w/50w/65w超聲功率下，超聲10s，間隔5s的條件下，超聲20次。