[發明專利]提高普魯蘭多糖產量的方法

在審

• 申請號: 201510904313.4
• 申請日: 2015-12-09
• 公開（公告）號: CN105624233A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 喬長晟;王萌;李振海;馬正旺;孫芳艷
• 申請（專利權）人: 天津北洋百川生物技術有限公司
• 主分類號: C12P19/10
• 分類號: C12P19/10
• 代理公司: 天津市尚儀知識產權代理事務所(普通合伙) 12217
• 代理人: 王山

技術領域

本發明涉及微生物發酵的技術領域，具體說是一種提高普魯蘭多糖產量的方法。

背景技術

普魯蘭多糖作為一種溶解性良好，黏合度優良的親水膠體，在食品、醫藥、化工等領域具有廣泛的使用范圍。然而普魯蘭多糖發酵時間長，產量也較難控制。大多數氨基酸，維生素等生長因子對于菌體生長具有促進作用。而氨基酸與維生素的添加種類和添加量不同，對于菌體生長的促進作用也有較大區別。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種提高普魯蘭多糖產量的方法。

本發明為解決公知技術中存在的技術問題所采取的技術方案是:

本發明的提高普魯蘭多糖產量的方法，包括以下步驟：

(1)將出芽短梗霉活化后，接入種子培養基，OD₆₀₀達到0.3以上，再將種子接入發酵培養基中；

(2)實時監控發酵液OD₆₀₀，當0.2＜OD₆₀₀＜0.3，加入發酵液體積0.02-0.03％復配劑Ⅰ；當OD₆₀₀≥0.6，加入發酵液體積0.03-0.05％的復配劑Ⅱ；

其中復配劑Ⅰ中包括谷氨酸、甲硫氨酸和維生素B2；

復配劑Ⅱ中包括絲氨酸和尿嘧啶核苷酸。

本發明還可以采用以下技術措施：

種子培養基中：蔗糖90g/L、酵母粉4g/L、氯化鈉3g/L、無水硫酸銨1g/L、MgSO4·7H₂O0.5g/L、K₂HPO₄3g/L、FeSO₄·7H₂O0.05g/L，pH6.5；發酵培養基中：蔗糖150g/L、蛋白胨7g/L、氯化鈉2.5g/L、MgSO₄·7H₂O0.4g/L、K₂HPO₄6g/L、FeSO₄·7H₂O0.05g/L，初始pH6.0。

出芽短梗霉Aureobasidiumpullulans，于2012年12月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,菌種編號CGMCCNO.7055，保藏地址：北京市朝陽區大屯路中國科學院生物研究所。

步驟(1)中，將出芽短梗霉菌株活化6～8h，接入種子培養基中，于28～32℃，180rpm，培養28～32h；OD₆₀₀＞0.3時，將其接入發酵培養基中，培養條件為OD₆₀₀＜0.5時，溫度控制在32℃，OD₆₀₀≥0.5時，溫度控制在28℃，通風量1.0(V/V)，轉速為300rpm。

復配劑Ⅰ中，按質量比，谷氨酸:甲硫氨酸:維生素B₂＝8:6:1；復配劑Ⅱ中，按質量比，絲氨酸:尿嘧啶核苷酸＝1:1。

本發明具有的優點和積極效果是:

本發明的提高普魯蘭多糖產量的方法中，在發酵培養的遲緩期(0.2＜OD₆₀₀＜0.3)加入復配劑Ⅰ，菌體生長速率明顯增加，達到對數生長期時間明顯縮短。由于其中谷氨酸在細胞內能分解成α-酮戊二酸，甲硫氨酸可分解成為琥珀酸輔酶A進入中心代謝途徑，增強中心代謝，而維生素B2經脫氫反應生成黃素-腺嘌呤二核苷酸，黃素單核苷酸，增強氧呼吸鏈的電子傳遞，三者相互協作，提高胞內產能，促進菌體生長。在發酵培養的對數生長期(OD₆₀₀≥0.6)加入復配劑Ⅱ，底物轉化速度加快，多糖合成能力增強，產量明顯增高。由于復配劑Ⅱ中的絲氨酸能產生多糖合成的次級代謝產物，而尿嘧啶核苷酸是普魯蘭多糖合成前體尿苷二磷酸葡萄糖的合成所用的重要前體物，故普魯蘭多糖產量有明顯增高，底物轉化率提高。

具體實施方式

以下通過實施例對本發明的技術方案進行詳細說明。

本發明的提高普魯蘭多糖產量的方法，包括以下步驟：

(1)將出芽短梗霉活化后，接入種子培養基，OD₆₀₀達到0.3以上，再將種子接入發酵培養基中；

(2)實時監控發酵液OD₆₀₀，當0.2＜OD₆₀₀＜0.3，加入發酵液體積0.02-0.03％復配劑Ⅰ；當OD₆₀₀≥0.6，加入發酵液體積0.03-0.05％的復配劑Ⅱ；

其中復配劑Ⅰ中包括谷氨酸、甲硫氨酸和維生素B2；