[發明專利]一種通過磁控電化學適配體傳感器同時檢測兩種霉菌毒素的方法

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• 申請號: 201510891030.0
• 申請日: 2015-12-07
• 公開（公告）號: CN105424777A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 王成全;錢靜;王坤;黃星奕;華夢娟;劉倩;郝楠
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;B82Y30/00;B82Y40/00
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1.一種通過磁控電化學適配體傳感器同時檢測兩種霉菌毒素的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1、金納米粒子包覆的Fe₃O₄微球的水分散液的制備；

步驟2、水溶性碲化鎘量子點溶液和水溶性硫化鉛量子點溶液的制備；

步驟3、單分散硅烷化SiO₂納米粒子水分散液的制備；

步驟4、CdTeQDs包覆的SiO₂納米球分散液和PbSQDs包覆的SiO₂納米球分散液的制備：取步驟2制備的CdTeQDs溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺溶液、步驟3制備的SiO₂納米粒子水分散液混合均勻，在冰水浴中攪拌反應，反應結束后，將產物離心分離、洗滌，再將產物分散到蒸餾水中，備用；取步驟2制備的PbSQDs溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺溶液、步驟3制備的SiO₂納米粒子水分散液混合均勻，在冰水浴中攪拌反應，反應結束后，將產物離心分離、洗滌，再將產物分散到蒸餾水中，備用；

步驟5、MB-aptamer1和MB-aptamer2捕獲探針的制備：包括用MB為載體負載經巰基修飾的伏馬毒素B1的適配體1，簡稱為MB-aptamer1；用MB為載體負載經巰基修飾的赭曲霉毒素A的適配體2，簡稱為MB-aptamer2；具體如下：將aptamer1的Tris-HCl緩沖溶液與含有磷酸三氯乙酯的Tris-HCl緩沖溶液混合，振蕩反應，反應完畢后，離心后得到即時活化的aptamer1溶液A，將所述活化的aptamer1溶液A與步驟1得到的金納米粒子包覆的Fe₃O₄微球的水分散液混合，得到混合液B，向混合液B中加入6-巰基己醇溶液得到混合液C，將混合液C進行振蕩反應，反應完畢后，對產物進行磁性分離并洗滌，最后將產物重新分散到水中，備用；將aptamer2的Tris-HCl緩沖溶液與含有磷酸三氯乙酯的Tris-HCl緩沖溶液混合，振蕩反應，反應完畢后，離心后得到即時活化的aptamer2溶液D，將所述即時活化的aptamer2溶液D與步驟1得到的金納米粒子包覆的Fe₃O₄微球的水分散液混合，得到混合液E，向混合液E中加入6-巰基己醇溶液得到混合液F，將混合液F進行振蕩反應，反應完畢后，對產物進行磁性分離并洗滌，最后將產物重新分散到水中，備用；

步驟6、適配體1的互補鏈與SiO₂PbS偶聯得到cDNA1-SiO₂PbS以及適配體2的互補鏈與SiO₂CdTe偶聯得到cDNA2-SiO₂CdTe納米生物探針的制備：取步驟4制備的CdTeQDs包覆的SiO₂納米球的水分散液與含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺的Tris-HCl緩沖溶液混合，得到混合液G，將混合液G在室溫下攪拌反應a，加入溶有適配體1的互補鏈的Tris-HCl緩沖溶液，得到混合液H，室溫下進行攪拌反應b，反應完畢后離心得到產物，并將產物重新用Tris-HCl緩沖溶液分散，備用；取步驟4制備的PbSQDs包覆的SiO₂納米球的水分散液與含有1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺的Tris-HCl緩沖溶液混合，得到混合液I，將混合液I在室溫下攪拌反應c，加入溶有適配體2的互補鏈的Tris-HCl緩沖溶液，得到混合液J，對混合液J進行室溫下攪拌反應d，反應完畢后離心得到產物，并將產物重新用Tris-HCl緩沖溶液分散，備用；

步驟7、MB-aptamer1/DNA1-SiO₂PbS和MB-aptamer2/DNA2-SiO₂CdTe納米生物復合材料的制備：取步驟6制得的cDNA1-SiO₂PbS分散液與步驟5制得的MB-aptamer1分散液混合，得到混合液K，室溫下振蕩反應，反應完畢后磁性分離產物并洗滌，最后將產物重新分散于Tris-HCl緩沖液中，備用；取步驟6制得的cDNA2-SiO₂CdTe分散液與步驟5制得的MB-aptamer2分散液混合，得到混合液L，室溫下振蕩反應，反應完畢后磁性分離產物并洗滌，最后將產物重新分散于Tris-HCl緩沖液中，備用；

步驟8、傳感器的構建及樣品的檢測，包括：

鉍膜修飾的絲網印刷電極的制備：將與電化學工作站連接的絲網印刷電極浸入硝酸鉍溶液中，通過外加電壓e沉積Bi³⁺，沉積完畢后，洗滌并干燥，鉍膜修飾的絲網印刷電極；

對OTA和FB1標準品進行檢測，建立標準曲線：將FB1和OTA標準品溶液分別與含有MB-aptamer1/DNA1-SiO₂PbS和MB-aptamer2/DNA2-SiO₂CdTe的混合液反應，室溫下溫育，反應完畢后用磁鐵收集反應后的磁性復合材料，用PBS沖洗后用含有PBS和HNO₃的混合溶液稀釋得到底液；將工作站相聯的鉍膜修飾的絲網印刷電極浸入含底液和HAc-NaAc緩沖溶液的混合溶液中，在外加電壓f下沉積Cd和Pb金屬單質，然后利用方波伏安法檢測Cd²⁺和Pb²⁺的溶出峰，通過Cd²⁺和Pb²⁺的溶出峰高與對應OTA和FB1標準品濃度建立標準曲線。