[發明專利]從三棱中提取抗腫瘤活性組分的方法及其應用

在審

• 申請號: 201510888276.2
• 申請日: 2015-12-06
• 公開（公告）號: CN105412735A
• 公開（公告）日: 2016-03-23
• 發明（設計）人: 張耀洲;龐莉;蓋其靜;杜思邈
• 申請（專利權）人: 正源堂（天津）生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/902
• 分類號: A61K36/902;A61P35/00;A61K125/00
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及中藥提取技術領域，具體涉及一種從三棱中提取抗腫瘤活性組分的方法，以及該活性組分在制備抗肝癌、抗肺癌藥物中的應用。

背景技術

三棱為黑三棱科植物黑三棱(Sparganiumstolonierum,Buch.-Ham)的干燥塊莖，其味苦、性平、入肝、脾經，具有破血行氣、消積止痛等功效。目前三棱一般整個或切片炮制入藥，缺乏必要的藥效物質基礎和藥效研究，缺乏合理的質量控制標準，難以確保臨床用藥的有效性、安全性、可持續性。可見，對三棱的化學成分進行進一步提取和研究非常有必要。

發明內容

本發明針對以上現有技術，采用高效液相色譜技術，從三棱中提取得到具備抗肝癌和抗肺癌活性的活性組分，且該分離方法穩定，重復性高，制備量大，適用于大規模工業化生產需要。

本發明所采用的技術方案為：

一種從三棱中提取抗腫瘤活性組分的方法，該方法包括以下步驟：

(1)超低溫粉碎：取干燥的三棱為原料，進行超微粉碎5～20min，得到超微粉；

(2)乙酸乙酯提取：在超微粉中加入乙酸乙酯，乙酸乙酯的加入體積(L)為超微粉質量(Kg)的8～10倍，70～75℃加熱1～3小時進行提取，離心取沉淀重復1～3次，合并提取的上清并濃縮干燥，為粗提組分；

(3)色譜分離：

(a)一維分離：取粗提組分用40％乙醇-正己烷溶液(乙醇與正己烷按體積比4︰6配比而成，下同理)20～60℃超聲溶解至濃度為60～100mg/ml，過膜后通過高壓制備液相色譜進行分離，采用的色譜柱為Silica正相硅膠色譜柱，采用A流動相為正己烷、B流動相為乙醇的二元流動相體系，進樣量為100～150mL/針，流動相流速為550～600mL/min，洗脫方式為B相濃度由0％至30％(即0％乙醇-正己烷溶液至30％乙醇-正己烷溶液)梯度洗脫50-60min，檢測波長為210～280nm，根據紫外吸收光譜收集10-17.5min洗脫液作為目的組分，經濃縮后真空冷凍干燥，得到一維液相組分；

(b)二維分離：取一維液相組分用40％乙醇-正己烷溶液20～60℃超聲溶解至濃度為60～100mg/ml，過膜后通過高壓制備液相色譜進行分離，采用的色譜柱為Silica正相硅膠色譜柱，采用A流動相為正己烷、B流動相為乙醇的二元流動相體系，進樣量為1～4mL/針，流動相流速為12～16mL/min，洗脫方式為B相濃度5％(即5％乙醇-正己烷溶液)等度洗脫25-30min，檢測波長為210～280nm，根據紫外吸收光譜收集24.3-26min洗脫液作為目的組分，經濃縮后真空冷凍干燥，得到本發明抗腫瘤活性組分。

作為優選，所述步驟(1)中超微粉碎時間為12min。

作為優選，所述步驟(2)中乙酸乙酯提取的提取溫度為72℃。

作為優選，所述步驟(2)中超微粉與乙酸乙酯的料液比為1︰8。

作為優選，所述步驟(3)(a)中粗提組分溶解于40％乙醇-正己烷溶液的濃度為80mg/ml。

作為優選，所述步驟(3)(a)一維分離中色譜柱的直徑為150mm，柱長為250mm，其中硅球粒徑為10μm，孔徑為10nm。

作為優選，所述步驟(3)(b)二維分離中一維液相組分溶解于40％乙醇-正己烷溶液的濃度為80mg/ml。

作為優選，所述步驟(3)(b)二維分離中色譜柱的直徑為20mm，柱長為250mm，其中硅球粒徑為10μm，孔徑為

本發明進一步提供上述提取得到的抗腫瘤活性組分在制備抗肺癌藥物中的應用。該抗腫瘤活性組分作為有效成分，按常規方法如口服、注射，與藥學上的可接受載體或賦形劑，制成適合口服、注射等給藥方式的劑型，如：片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、丸劑、溶液劑、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下含片、注射劑、軟膏劑、栓劑、吸入劑等多種劑型。

本發明還進一步提供上述提取得到的抗腫瘤活性組分在制備抗肝癌藥物中的應用。該抗腫瘤活性組分作為有效成分，按常規方法如口服、注射，與藥學上的可接受載體或賦形劑，制成適合口服、注射等給藥方式的劑型，如：片劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、丸劑、溶液劑、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下含片、注射劑、軟膏劑、栓劑、吸入劑等多種劑型。

本發明原料三棱為黑三棱科植物黑三棱的干燥塊莖，其化學成分復雜，所以本發明先選用乙酸乙酯進行有效組分的粗提，且乙酸乙酯為脂溶性溶劑，與其相似相溶的組分也應該具備進入生物活性細胞所必需的脂溶性特性，從而具有更高的進入細胞參與細胞內作用的可能性。