[發(fā)明專利]一種低致敏性魚(yú)類過(guò)敏原小清蛋白、制備方法及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510883944.2
• 申請(qǐng)日: 2015-12-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105384804B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡秋鳳;趙勇娟;曹敏杰;劉光明;張凌晶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/46
• 分類號(hào): C07K14/46;C07K1/107;A61K38/17;A61P37/08;A23L33/17
• 代理公司: 廈門市精誠(chéng)新創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 方惠春

本發(fā)明公開(kāi)了低致敏性魚(yú)類過(guò)敏原小清蛋白、制備方法及其用途。所述低致敏性魚(yú)類過(guò)敏原小清蛋白有3個(gè)氨基酸殘基的糖基化修飾，分別為第88位賴氨酸殘基、第97位賴氨酸殘基以及第108位賴氨酸殘基的糖基化修飾。還進(jìn)一步，還有第46位賴氨酸殘基、第55位賴氨酸殘基以及第84位賴氨酸殘基的糖基化修飾。具有低致敏性的特點(diǎn)又保留了免疫原性。通過(guò)將小清蛋白與糖溶液混勻冷凍干燥，美拉德反應(yīng)，復(fù)溶后進(jìn)行脫糖處理即可制備得到。可用于制備預(yù)防過(guò)敏原致敏，特別是魚(yú)類過(guò)敏原致敏的藥物及其制備低致敏食品，特別是低致敏魚(yú)類相關(guān)食品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蛋白質(zhì)領(lǐng)域，尤其涉及一種低致敏性魚(yú)類過(guò)敏原小清蛋白、制備方法及其用途。

背景技術(shù)

食品過(guò)敏是指食物中的某些物質(zhì)(通常是蛋白質(zhì))攝入體內(nèi)被機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別為外來(lái)物而發(fā)生的免疫變態(tài)反應(yīng)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外食物過(guò)敏發(fā)病率明顯上升。據(jù)2015年的一項(xiàng)調(diào)查結(jié)果顯示，我國(guó)城市兒童的食物過(guò)敏率約為3.2％。魚(yú)類是八大類過(guò)敏食物之一，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)魚(yú)類過(guò)敏原的研究表明，分子量為10-14kDa的小清蛋白(parvalbumin，PV)廣泛存在于各類魚(yú)中，是魚(yú)類的主要過(guò)敏原。因此，降低魚(yú)肉中小清蛋白的致敏性對(duì)于生產(chǎn)低致敏性魚(yú)類食品以及預(yù)防魚(yú)類食物過(guò)敏具有重要的意義。

目前對(duì)影響小清蛋白致敏性的因素研究很少，多數(shù)是探討鈣離子的影響，通過(guò)去除鈣離子改變小清蛋白的構(gòu)象，從而降低其致敏性。但這一作用被證實(shí)對(duì)天然小清蛋白的影響較小。國(guó)家發(fā)明專利“一種淡水魚(yú)小清蛋白過(guò)敏原抑制劑”(專利號(hào)ZL201410139704.7)是采用人工合成的小RNA化合物，注入魚(yú)肌肉局部，抑制小清蛋白的表達(dá)，從而降低魚(yú)肌肉中小清蛋白的含量。但該方法由于使用的是化學(xué)合成的核酸分子，在使用方面存在局限性。

目前常用的降低食物致敏性的方法是高壓處理或酶解，通過(guò)改變蛋白構(gòu)象，掩藏或破壞抗原表位，但會(huì)損壞食品的質(zhì)構(gòu)和風(fēng)味。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種低致敏性魚(yú)類過(guò)敏原小清蛋白。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種低致敏性魚(yú)類過(guò)敏原小清蛋白，其特征在于，有3個(gè)氨基酸殘基的糖基化修飾，分別為第88位賴氨酸殘基、第97位賴氨酸殘基以及第108位賴氨酸殘基的糖基化修飾。

進(jìn)一步，還有第46位賴氨酸殘基、第55位賴氨酸殘基以及第84位賴氨酸殘基的糖基化修飾；

任選的，所述的糖基化修飾為葡萄糖或丙酮醛或吡咯琳或羧甲基或咪唑琳酮。

進(jìn)一步，第46位賴氨酸殘基發(fā)生丙酮醛修飾；第55賴氨酸殘基發(fā)生葡萄糖，丙酮醛，吡咯琳修飾；第84賴氨酸殘基發(fā)生丙酮醛，吡咯琳，羧甲基，咪唑琳酮修飾；第88賴氨酸殘基發(fā)生丙酮醛，吡咯琳，羧甲基，咪唑琳酮修飾；第97賴氨酸殘基發(fā)生葡萄糖修飾；第108賴氨酸殘基發(fā)生咪唑琳酮修飾。

進(jìn)一步，所述低致敏性魚(yú)類過(guò)敏原小清蛋白保留有免疫原性。

本發(fā)明另一方面，所述低致敏性魚(yú)類過(guò)敏原小清蛋白的制備方法，其特征在于，步驟為，

(1)將小清蛋白與糖溶液混勻冷凍干燥，

(2)美拉德反應(yīng)得到反應(yīng)產(chǎn)物，

(3)反應(yīng)產(chǎn)物復(fù)溶后進(jìn)行脫糖處理即可。

進(jìn)一步，所述步驟(1)中的小清蛋白通過(guò)重組表達(dá)獲得或從魚(yú)肉中分離得到；

任選的，所述步驟(1)為用含有1mmol/L NaHCO₃ 20mmol/L，pH7.0的PBS溶液與糖配制糖溶液，真空冷凍干燥24小時(shí)；

優(yōu)選的，所述小清蛋白與糖的質(zhì)量比為1:3-1:16；

優(yōu)選的，所述糖為葡萄糖或木糖。