[發明專利]一種預測大腸癌細胞對p38MAPK激酶抑制劑敏感性的方法

在審

• 申請號: 201510854669.1
• 申請日: 2015-11-28
• 公開（公告）號: CN105467119A
• 公開（公告）日: 2016-04-06
• 發明（設計）人: 張燕捷;秦曉雨;王欣欣;劉峰;姜斌
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬第三人民醫院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種預測大腸癌細胞對p38MAPK激酶抑制劑敏感性的方法，其特征在于， 包括應用免疫組化或免疫熒光技術檢測大腸癌細胞的PP2AC表達水平，并測算 H-score的步驟；其中，若H-score數值小于100，則判定大腸癌細胞對p38MAPK 激酶抑制劑敏感，若H-score數值大于200，則判定大腸癌細胞對p38MAPK激 酶抑制劑耐藥。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，免疫組化操作具體為：

步驟一，切片脫蠟至水：

二甲苯Ⅰ、Ⅱ脫蠟5-10min，充分脫去石蠟；梯度酒精脫二甲苯：水洗，然后將 片子插到抗原修復盒內，用蒸餾水洗2遍；

步驟二，滅活內源性過氧化物酶：

將步驟一所得切片加入3％過氧化氫使液面覆蓋組織10min，用蒸餾水洗2次， 每次3min；

步驟三，抗原修復：

將步驟二所得切片置于檸檬酸緩沖液中微波加熱修復，待自然冷卻至室溫后先用 蒸餾水洗2次，再用PBS洗3次，每次5min；

步驟四，用非免疫血清封閉，孵育：

將步驟三所得切片用吸水紙將組織周圍的水分盡量吸盡，用免疫組化筆在組織周 圍畫一個圈，然后加入血清覆蓋組織，放入濕盒室溫孵育10-30min，濕盒底部 加入少量的水；

步驟五，一抗孵育：

棄去血清，滴加一抗4℃過夜孵育，第二天復溫45min后，用PBS將切片洗3 次，每次5min；

步驟六，二抗孵育：

滴加二抗室溫孵育30min，PBS洗3次每次5min；

步驟七，顯色反應：

加DAB顯色5－10min，浸入純水終止顯色；

步驟八，復染：

蘇木素染色，然后使用水沖洗，1％鹽酸酒精分化組織顏色變紅立即取出放入水 中，水沖洗返藍，梯度酒精脫水，Ⅰ、Ⅱ二甲苯脫酒精各兩分鐘，晾干或吹干， 滴加少量的中性樹脂取一蓋玻片進行封片；

步驟九，H-score測算。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，免疫熒光操作具體為：

步驟一，包埋好的標本用切片機切石蠟切片，經60℃烘片2小時，二甲苯脫蠟， 梯度酒精復水；

步驟二，抗原修復，使用修復液，微波蒸汽2分鐘，98度水浴25分鐘，冷卻25 分鐘；

步驟三，PBS洗3次，每次5min；

步驟四，使用10％羊血清封閉60min；

步驟五，一抗4℃孵育過夜；

步驟六，二抗25℃孵育1h；

步驟七，封片及檢測，滴加一滴內含DAPI的封片劑封片；

步驟八，H-score測算。