[發(fā)明專利]一種提高類芽孢桿菌產(chǎn)糖量的選育方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510838824.0
• 申請(qǐng)日: 2015-11-27
• 公開（公告）號(hào): CN105316312B
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡筱敏;姜彬慧;龐寧;黃永剛;張?zhí)m蘭;孫偉麗;張佳琪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/01
• 分類號(hào): C12N15/01;C02F3/34;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽東大知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21109
• 代理人: 梁焱

本發(fā)明提供一種提高類芽孢桿菌產(chǎn)糖量的選育方法及其應(yīng)用，所述方法為：（1）將類芽孢桿菌出發(fā)菌株接種到普通液體培養(yǎng)基中活化；（2）稀釋成一定濃度菌懸液；（3）制成菌膜后進(jìn)行誘變；（4）涂布于普通固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；（5）初步篩選；（6）將初篩菌株接種于普通液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到產(chǎn)糖量較高的菌株；（7）確定步驟（6）得到的為產(chǎn)糖量較高的類芽孢桿菌菌株；（8）確定產(chǎn)糖量較高菌株的產(chǎn)糖量遺傳穩(wěn)定性。所述選育方法應(yīng)用于粉煤灰廢水、水體中微藻的沉降處理。本發(fā)明方法利用等離子體誘變技術(shù)對(duì)高產(chǎn)微生物絮凝劑的類芽孢桿菌進(jìn)行誘變育種，有效提高了類芽孢桿菌的絮凝效率和絮凝劑產(chǎn)量，應(yīng)用于粉煤灰廢水、水體中微藻的沉降處理。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高類芽孢桿菌產(chǎn)糖量的選育方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

微生物絮凝劑是利用生物技術(shù)，從微生物體或其分泌物中富集、篩選、純化而獲得的一種安全、易生物降解的新型水處理絮凝劑，微生物絮凝劑作為一種天然的絮凝劑，它在確保應(yīng)用安全性的前提下還具有光譜絮凝活性，這為其在與人體健康密切關(guān)系的給水排水處理、食品加工和發(fā)酵工業(yè)等方而提供了廣闊的應(yīng)用前景。

隨著工業(yè)廢水的大量排放，水體污染日益加重，水環(huán)境問題引起了廣泛的關(guān)注。絮凝沉淀是目前國(guó)內(nèi)外普遍采用的一種水處理方法。而絮凝劑是沉降水處理過程的核心，在其中起著至關(guān)重要的作用。由于微生物絮凝劑具有絮凝范圍廣泛、高效、無毒、無二次污染等優(yōu)點(diǎn)，使得近年來對(duì)微生物絮凝劑的研究取得了很大的進(jìn)步。但是于此同時(shí)，仍有缺乏理論指導(dǎo)、制備成本高、難于大規(guī)模生產(chǎn)等問題迫切需要解決。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的一些問題，本發(fā)明提供一種提高類芽孢桿菌產(chǎn)糖量的選育方法及其應(yīng)用，所述選育方法是利用等離子體誘變技術(shù)對(duì)高產(chǎn)微生物絮凝劑的類芽孢桿菌進(jìn)行誘變育種，提高了其絮凝效率和絮凝劑產(chǎn)量。本發(fā)明采用的類芽孢桿菌型號(hào)為A9，已在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，建議分類命名為：類芽孢桿菌Paenibacillus sp.，保藏編號(hào)為：CGMCC2040，保藏日期為：2007年5月11日，地址：中國(guó).北京.朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)；本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種提高類芽孢桿菌產(chǎn)糖量的選育方法，按照以下工藝步驟進(jìn)行：

（1）將類芽孢桿菌出發(fā)菌株接種到普通液體培養(yǎng)基中，活化20~32h；

（2）將活化的菌液離心，棄去上清液，沉淀菌體用無菌生理鹽水稀釋成濃度為100000~150000cfu/ml的菌懸液；

（3）取步驟（2）的菌懸液15~20uL制成菌膜，利用多功能等離子體誘變系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行誘變；

（4）取誘變后的菌體加入無菌生理鹽水稀釋至1mL，取0.1mL均勻涂布于普通固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)36~48h；

（5）根據(jù)菌落形態(tài)大小，初步篩選出等離子體誘變平板上與出發(fā)菌株形態(tài)相似、菌落半徑較大的初篩菌株；

（6）將類芽孢桿菌初篩菌株接種于普通液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)20~32h，得到產(chǎn)糖量較高的類芽孢桿菌菌株；

（7）將步驟（6）的菌懸液以1%的接種量轉(zhuǎn)接到發(fā)酵液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24~72h；離心，分離，保留上清液，利用醇沉-冷凍干燥法得到的粗多糖即為絮凝劑，稱量粗多糖重量，確定步驟（6）得到的為產(chǎn)糖量較高的類芽孢桿菌菌株；

（8）將步驟（6）的產(chǎn)糖量較高的類芽孢桿菌菌株接種于普通液體培養(yǎng)基中，重復(fù)步驟（6）和（7）的過程5~8次，確定其產(chǎn)糖量的遺傳穩(wěn)定性。

所述類芽孢桿菌出發(fā)菌株由從果樹根系土壤分離篩選純化獲得。

所述普通液體培養(yǎng)基的化學(xué)成分及濃度為：牛肉膏5.0 g/L，蛋白胨10.0 g/L，氯化鈉5.0 g/L，蒸餾水1L/L。