[發明專利]一種提高類芽孢桿菌產糖量的選育方法及其應用

有效

• 申請號: 201510838824.0
• 申請日: 2015-11-27
• 公開（公告）號: CN105316312B
• 公開（公告）日: 2018-08-03
• 發明（設計）人: 胡筱敏;姜彬慧;龐寧;黃永剛;張蘭蘭;孫偉麗;張佳琪
• 申請（專利權）人: 東北大學
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01;C02F3/34;C12R1/01
• 代理公司: 沈陽東大知識產權代理有限公司 21109
• 代理人: 梁焱

1.一種提高類芽孢桿菌產糖量的選育方法，其特征在于按照以下工藝步驟進行：

(1)將類芽孢桿菌出發菌株接種到普通液體培養基中，活化20～32h；

(2)將活化的菌液離心，棄去上清液，沉淀菌體用無菌生理鹽水稀釋成濃度為100000～150000cfu/ml的菌懸液；

(3)取步驟(2)的菌懸液15～20uL制成菌膜，利用多功能等離子體誘變系統對其進行誘變；所述誘變過程的條件為：電源功率為300W，工作氣流為12L/min，等離子體發射源與樣品之間的高度為5mm，工作氣體為氮氣，照射時間為105～110s；

(4)取誘變后的菌體加入無菌生理鹽水稀釋至1mL，取0.1mL均勻涂布于普通固體培養基中，培養36～48h；

(5)根據菌落形態大小，初步篩選出等離子體誘變平板上與出發菌株形態相似、菌落半徑較大的初篩菌株；

(6)將類芽孢桿菌初篩菌株接種于普通液體培養基中，培養20～32h，得到產糖量較高的類芽孢桿菌菌株；

(7)將步驟(6)的菌懸液以1％的接種量轉接到發酵液體培養基中，于溫度25～30℃，pH7～8，搖床轉速130～160r/min的條件下培養24～72h；離心，分離，保留上清液，利用醇沉-冷凍干燥法得到的粗多糖即為絮凝劑，稱量粗多糖重量，確定步驟(6)得到的為產糖量較高的類芽孢桿菌菌株；所述發酵培養基的化學成分及濃度為：葡萄糖20.0g/L，磷酸二氫鉀2.0g/L，磷酸氫二鉀5.0g/L，七水硫酸鎂0.2g/L，氯化鈉0.1g/L，脲0.5g/L，酵母膏0.5g/L，蒸餾水1L/L；

(8)將步驟(6)的產糖量較高的類芽孢桿菌菌株接種于普通液體培養基中，重復步驟(6)和(7)的過程5～8次，確定其產糖量的遺傳穩定性。

2.根據權利要求1所述的一種提高類芽孢桿菌產糖量的選育方法，其特征在于所述普通液體培養基的化學成分及濃度為：牛肉膏5.0g/L，蛋白胨10.0g/L，氯化鈉5.0g/L，蒸餾水1L/L。

3.根據權利要求1所述的一種提高類芽孢桿菌產糖量的選育方法，其特征在于所述普通固體培養基的化學成分及濃度為：牛肉膏5.0g/L，蛋白胨10.0g/L，氯化鈉5.0g/L，瓊脂15.0～20.0g/L，蒸餾水1L/L。

4.根據權利要求1所述的一種提高類芽孢桿菌產糖量的選育方法，其特征在于所述活化過程的條件為：溫度25～30℃，pH6.5～7.5，搖床轉速130～160r/min。

5.根據權利要求1所述的一種提高類芽孢桿菌產糖量的選育方法，其特征在于所述培養過程的條件為：溫度25～30℃，pH6.5～7.5。

6.根據權利要求1所述的一種提高類芽孢桿菌產糖量的選育方法，其特征在于所述離心過程的條件為：轉速8000～10000r/min，時間10～30min。

7.權利要求1所述的一種提高類芽孢桿菌產糖量的選育方法應用于粉煤灰廢水、水體中微藻的沉降處理。